Site-specific chemoenzymatic labeling of aerolysin enables the identification of new aerolysin receptors.
Site-specific chemoenzymatic labeling of aerolysin enables the identification of new aerolysin receptors.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0109883
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Guimaraes CP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wuethrich I;Peeters JG;Blom AE;Theile CS;Li Z;Spooner E;Ploegh HL;Guimaraes CP
气溶素是一种分泌的细菌毒素，其穿透靶细胞的质膜，具有致命的后果。先前探索的天然和表位标记形式的毒素不允许用选择的探针对成熟毒素进行位点特异性修饰。我们探索分选酶介导的转肽反应（分选）安装荧光团和生物素在气单胞菌溶素的三个不同的网站，而不损害毒素的细胞膜的结合，并以最小的影响毒性。使用在两个不同位点用不同荧光团标记的气溶素的版本，我们独立于毒素的N-末端部分跟踪C-末端肽的命运，并显示其在中毒过程中的损失。利用气单胞菌溶素的生物素化形式，我们鉴定了间皮素、尿激酶纤溶酶原激活物表面受体（uPAR，CD 87）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1和CD 59糖蛋白作为气单胞菌溶素受体，所有这些都预测或已知被糖基磷脂酰肌醇锚修饰。这里报道的分选酶介导的反应可以很容易地扩展到其他孔形成蛋白。
Aerolysin is a secreted bacterial toxin that perforates the plasma membrane of a target cell with lethal consequences. Previously explored native and epitope-tagged forms of the toxin do not allow site-specific modification of the mature toxin with a probe of choice. We explore sortase-mediated transpeptidation reactions (sortagging) to install fluorophores and biotin at three distinct sites in aerolysin, without impairing binding of the toxin to the cell membrane and with minimal impact on toxicity. Using a version of aerolysin labeled with different fluorophores at two distinct sites we followed the fate of the C-terminal peptide independently from the N-terminal part of the toxin, and show its loss in the course of intoxication. Making use of the biotinylated version of aerolysin, we identify mesothelin, urokinase plasminogen activator surface receptor (uPAR, CD87), glypican-1, and CD59 glycoprotein as aerolysin receptors, all predicted or known to be modified with a glycosylphosphatidylinositol anchor. The sortase-mediated reactions reported here can be readily extended to other pore forming proteins.
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影响因子：
7.8
作者：
Abrami, L;Fivaz, M;Glauser, PE;Parton, RG;van der Goot, FG
通讯作者：
van der Goot, FG
影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1083/jcb.201108103
发表时间：
2011-11-28
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Guimaraes CP;Carette JE;Varadarajan M;Antos J;Popp MW;Spooner E;Brummelkamp TR;Ploegh HL
通讯作者：
Ploegh HL
影响因子：
2.9
作者：
HOWARD, SP;BUCKLEY, JT
通讯作者：
BUCKLEY, JT
影响因子：
3.6
作者：
Cowell, S;Aschauer, W;Buckley, JT
通讯作者：
Buckley, JT