Efficient targeted insertion of an unselected marker into the vaccinia virus genome.
Efficient targeted insertion of an unselected marker into the vaccinia virus genome.
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将未选择的标记有效定向插入痘苗病毒基因组中。
DOI：
10.1016/0042-6822(86)90171-6
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Condit,RC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fathi,Z;Sridhar,P;Pacha,RF;Condit,RC
描述了一种方法，通过该方法可以将未选择的标记插入痘苗病毒基因组中。用有缺陷的病毒（靛红-β-缩氨基硫脲依赖性病毒或温度敏感病毒）感染细胞，然后用全长野生型基因组痘苗病毒 DNA 和含有膦酰乙酸抗性等位基因的克隆痘苗 DNA 分子的混合物进行共转化。在不允许有缺陷的病毒但不选择掺入膦酰乙酸抗性的条件下温育后，测定病毒产量以确定所涉及的所有标记的存在。将膦酰乙酸抗性插入到其他野生型基因组中，效率为 25-33%。这意味着相对于对照，效率提高了 150 至 3000 倍。该程序对于痘苗病毒基因组的工程应该非常有用。
A method is described by which an unselected marker can be inserted into the vaccinia virus genome. Cells were infected with defective virus (either isatin-β-thiosemicarbazone dependent or temperature sensitive) and then cotransformed with a mixture of full-length wild-type genomic vaccinia virus DNA and a cloned vaccinia DNA molecule containing an allele for phosphonoacetic acid resistance. After incubation under conditions which are nonpermissive for the defective virus but which do not select for incorporation of phosphonoacetic acid resistance, the virus yields were assayed for the presence of all markers involved. phosphonoacetic acid resistance was inserted into an otherwise wild-type genome with an efficiency of 25–33%. This represents an increase in efficiency of 150 to 3000-fold relative to controls. The procedure should be extremely useful for engineering the vaccinia virus genome.
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