Cas12a mediates efficient and precise endogenous gene tagging via MITI: microhomology-dependent targeted integrations.
Cas12a mediates efficient and precise endogenous gene tagging via MITI: microhomology-dependent targeted integrations.
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DOI：
10.1007/s00018-019-03396-8
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发表时间：
2020-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Wu S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li P;Zhang L;Li Z;Xu C;Du X;Wu S
有效的外源DNA整合可以通过Cas9通过非同源末端连接途径介导。然而，这样的整合通常是不精确的，并且在外部DNA和基因组基因座之间的连接处包含多种突变。在这里，我们描述了一个微同源依赖的有针对性的整合方法，指定MITI，精确的位点特异性基因插入。我们发现，MITI策略对于插入外部DNA和标记内源基因产生比Cas9 HITI更高的敲入准确性。此外，结合阴性选择和四种不同的CrRNA靶向供体载体和基因组靶向位点与CrRNA阵列，MITI促进了所有连接处的精确连接。因此，我们基于Cas 12 a的MITI方法增加了精确基因组工程方法的库，并为各种基因编辑应用提供了有用的工具。本文的在线版本（10.1007/s 00018 -019-03396-8）包含补充材料，可供授权用户使用。
Efficient exogenous DNA integration can be mediated by Cas9 through the non-homology end-joining pathway. However, such integrations are often imprecise and contain a variety of mutations at the junctions between the external DNA and the genomic loci. Here we describe a microhomology-dependent targeted integration method, designated MITI, for precise site-specific gene insertions. We found that the MITI strategy yielded higher knock-in accuracy than Cas9 HITI for the insertion of external DNA and tagging endogenous genes. Furthermore, in combination with negative selection and four different CrRNAs targeting donor vectors and genome-targeted sites with a CrRNA array, MITI facilitated precise ligation at all junctions. Therefore, our Cas12a-based MITI method increases the repertoire of precision genome engineering approaches and provides a useful tool for various gene editing applications. The online version of this article (10.1007/s00018-019-03396-8) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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