Imaging of Single Dye-Labeled Chemotaxis Proteins in Live Bacteria Using Electroporation.
Imaging of Single Dye-Labeled Chemotaxis Proteins in Live Bacteria Using Electroporation.
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使用电穿孔对活细菌中单染料标记的趋化蛋白进行成像。
DOI：
10.1007/978-1-4939-7577-8_19
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Di Paolo D
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Di Paolo D
在过去的20年里，基因融合荧光蛋白（FPs）的使用极大地促进了大肠杆菌趋化信号的研究。包括应答调节蛋白CheY的激活及其与鞭毛马达的相互作用。然而，这种方法受到许多生物和生物物理方面的限制。例如，当与大体积FP融合时，并非所有融合物都是完全功能性的，所述大体积FP可以具有与其融合的对应物相似的分子量。FP可能干扰蛋白质的天然相互作用，并且它们的发色团具有低亮度和光稳定性，以及快速的光漂白速率。电穿孔允许用有机染料标记的纯化的CheY蛋白内化到E.浓度可控的大肠杆菌。使用荧光视频显微镜，可以观察到单个CheY分子在细胞内扩散，并与感觉簇和鞭毛马达真实的时间相互作用。
For the last 2 decades, the use of genetically fused fluorescent proteins (FPs) has greatly contributed to the study of chemotactic signaling inE. coli, including the activation of the response regulator protein CheY and its interaction with the flagellar motor. However, this approach suffers from a number of limitations, both biological and biophysical. For example, not all fusions are fully functional when fused to a bulky FP, which can have a similar molecular weight to its fused counterpart. FPs may interfere with the native interactions of the protein, and their chromophores have low brightness and photostability, and fast photobleaching rates. Electroporation allows for internalization of purified CheY proteins labeled with organic dyes intoE. colicells in controllable concentrations. Using fluorescence video microscopy, it is possible to observe single CheY molecules diffusing within cells and interacting with the sensory clusters and the flagellar motors in real time.
影响因子：
46.2
作者：
Day RN;Davidson MW
通讯作者：
Davidson MW
影响因子：
3.4
作者：
Crawford, Robert;Torella, Joseph P.;Kapanidis, Achillefs N.
通讯作者：
Kapanidis, Achillefs N.
影响因子：
7.7
作者：
Rogala KB;Dynes NJ;Hatzopoulos GN;Yan J;Pong SK;Robinson CV;Deane CM;Gönczy P;Vakonakis I
通讯作者：
Vakonakis I