Site-specific chromosomal integration of large synthetic constructs.
Site-specific chromosomal integration of large synthetic constructs.
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DOI：
10.1093/nar/gkp1193
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发表时间：
2010-04
影响因子：
14.9
通讯作者：
Cox EC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kuhlman TE;Cox EC
我们已经开发了一种有效的，易于使用的两步系统的大型遗传结构的定点插入到大肠杆菌染色体的任意位置。该系统使用λ-Red介导的重组工程，伴随着在染色体中引入双链DNA断裂和携带所需插入片段的供体质粒。与现有的重组工程或噬菌体衍生的插入方法相比，我们的方法允许将非常大的片段插入任何所需的位置和任何方向。我们证明了这种方法通过插入一个7 kb的片段组成的金星标记的乳糖阻遏基因沿着与目标lacZ报告到6个独特的网站对称分布的染色体。我们还证明了该方法的普遍性和可重复性，通过重复应用该方案，将乳糖阻遏物基因和lacZ靶分别插入染色体周围不同位置的染色体中。
We have developed an effective, easy-to-use two-step system for the site-directed insertion of large genetic constructs into arbitrary positions in the Escherichia coli chromosome. The system uses λ-Red mediated recombineering accompanied by the introduction of double-strand DNA breaks in the chromosome and a donor plasmid bearing the desired insertion fragment. Our method, in contrast to existing recombineering or phage-derived insertion methods, allows for the insertion of very large fragments into any desired location and in any orientation. We demonstrate this method by inserting a 7-kb fragment consisting of a venus-tagged lac repressor gene along with a target lacZ reporter into six unique sites distributed symmetrically about the chromosome. We also demonstrate the universality and repeatability of the method by separately inserting the lac repressor gene and the lacZ target into the chromosome at separate locations around the chromosome via repeated application of the protocol.
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影响因子：
14.9
作者：
Orford, M;Nefedov, M;Ioannou, P A
通讯作者：
Ioannou, P A
DOI：
10.1073/pnas.1232375100
发表时间：
2003-06-10
影响因子：
11.1
作者：
Yu, DG;Sawitzke, JA;Court, DL
通讯作者：
Court, DL
影响因子：
56.9
作者：
Elf, Johan;Li, Gene-Wei;Xie, X. Sunney
通讯作者：
Xie, X. Sunney
影响因子：
14.9
作者：
Warming S;Costantino N;Court DL;Jenkins NA;Copeland NG
通讯作者：
Copeland NG
影响因子：
46.9
作者：
Nagai, T;Ibata, K;Miyawaki, A
通讯作者：
Miyawaki, A