Cas6 specificity and CRISPR RNA loading in a complex CRISPR-Cas system.
Cas6 specificity and CRISPR RNA loading in a complex CRISPR-Cas system.
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DOI：
10.1093/nar/gku308
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发表时间：
2014-06
影响因子：
14.9
通讯作者：
White MF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sokolowski RD;Graham S;White MF
CRISPR-Cas是一种适应性原核免疫系统，提供针对病毒和其他移动的遗传元件的保护。在I型和III型CRISPR-Cas系统中，CRISPR RNA（crRNA）通过Cas 6内切核酸酶切割初级转录物产生，并加载到多亚基监视/效应子复合物中，允许同源定向检测和切割入侵元件。高度研究的CRISPR-Cas系统，如大肠杆菌和铜绿假单胞菌中的那些，具有单个Cas 6酶，其是监视复合物的组成亚基。相比之下，硫磺硫化叶菌具有复杂的CRISPR-Cas系统，包括三种类型的监测复合物（Cascade/type I-A，CSM/type III-A和CMR/type III-B），五种Cas 6旁系同源物和两种不同的CRISPR重复家族（AB和CD）。在这里，我们研究了来自S.太阳神Cas 6 -1亚型对CD家族CRISPR重复序列具有特异性，通过多重转换催化产生crRNA，而Cas 6 -3具有更广泛的特异性，并且还加工具有CRISPR重复序列相关序列的非编码RNA。监测复合物中crRNA的深度测序揭示了源自AB和CD基因座的间隔区的偏倚分布，表明Cas 6旁系同源物与其下游效应复合物之间的功能偶联。
CRISPR-Cas is an adaptive prokaryotic immune system, providing protection against viruses and other mobile genetic elements. In type I and type III CRISPR-Cas systems, CRISPR RNA (crRNA) is generated by cleavage of a primary transcript by the Cas6 endonuclease and loaded into multisubunit surveillance/effector complexes, allowing homology-directed detection and cleavage of invading elements. Highly studied CRISPR-Cas systems such as those in Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa have a single Cas6 enzyme that is an integral subunit of the surveillance complex. By contrast, Sulfolobus solfataricus has a complex CRISPR-Cas system with three types of surveillance complexes (Cascade/type I-A, CSM/type III-A and CMR/type III-B), five Cas6 paralogues and two different CRISPR-repeat families (AB and CD). Here, we investigate the kinetic properties of two different Cas6 paralogues from S. solfataricus. The Cas6-1 subtype is specific for CD-family CRISPR repeats, generating crRNA by multiple turnover catalysis whilst Cas6-3 has a broader specificity and also processes a non-coding RNA with a CRISPR repeat-related sequence. Deep sequencing of crRNA in surveillance complexes reveals a biased distribution of spacers derived from AB and CD loci, suggesting functional coupling between Cas6 paralogues and their downstream effector complexes.
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影响因子：
16
作者：
Hale, Caryn R.;Majumdar, Sonali;Elmore, Joshua;Pfister, Neil;Compton, Mark;Olson, Sara;Resch, Alissa M.;Glover, Claiborne V. C., III;Graveley, Brenton R.;Terns, Rebecca M.;Terns, Michael P.
通讯作者：
Terns, Michael P.
影响因子：
48
作者：
Mali, Prashant;Esvelt, Kevin M.;Church, George M.
通讯作者：
Church, George M.
DOI：
10.1126/science.1165771
发表时间：
2008-12-19
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Marraffini LA;Sontheimer EJ
通讯作者：
Sontheimer EJ
影响因子：
14.9
作者：
Niewoehner O;Jinek M;Doudna JA
通讯作者：
Doudna JA
影响因子：
16
作者：
Spilman M;Cocozaki A;Hale C;Shao Y;Ramia N;Terns R;Terns M;Li H;Stagg S
通讯作者：
Stagg S