High-fidelity gene synthesis by retrieval of sequence-verified DNA identified using high-throughput pyrosequencing.
High-fidelity gene synthesis by retrieval of sequence-verified DNA identified using high-throughput pyrosequencing.
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DOI：
10.1038/nbt.1710
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发表时间：
2010-12
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
涉及数百万个碱基的合成生物系统的建立仍然受到所需的高质量合成DNA的限制。进一步开放该领域的重要驱动力是化学DNA合成的准确性和规模以及从短片段组装的较长DNA的下游加工。我们开发了一种新的，高度并行和小型化的方法，用于制备高质量的DNA称为“兆克隆”，通过使用下一代测序（NGS）技术在制备的方式。我们通过与基于珠的高通量焦磷酸测序平台组合处理常规和微阵列衍生的DNA寡核苷酸来证明我们的方法，在第一实施方案中获得微阵列寡核苷酸的500倍误差减少。我们还展示了作为巨克隆过程一部分的合成基因的组装。原则上，在一次Megacloner运行中可以对多达数百万个DNA片段进行测序、表征和分类，从而实现许多新的应用。
The setup of synthetic biological systems involving millions of bases is still limited by the required high quality of synthetic DNA. Important drivers to further open up the field are the accuracy and scale of chemical DNA synthesis and the downstream processing of longer DNA assembled from short fragments. We developed a new, highly parallel and miniaturized method for the preparation of high quality DNA termed “Megacloning” by using Next Generation Sequencing (NGS) technology in a preparative way. We demonstrate our method by processing both conventional and microarray-derived DNA oligonucleotides in combination with a bead-based high throughput pyrosequencing platform, gaining a 500-fold error reduction for microarray oligonucleotides in a first embodiment. We also show the assembly of synthetic genes as part of the Megacloning process. In principle, up to millions of DNA fragments can be sequenced, characterized and sorted in a single Megacloner run, enabling many new applications.
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影响因子：
46.9
作者：
Singh-Gasson, S;Green, RD;Cerrina, F
通讯作者：
Cerrina, F
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1073/pnas.83.22.8447
发表时间：
1986-11-01
影响因子：
11.1
作者：
JEFFERSON, RA;BURGESS, SM;HIRSH, D
通讯作者：
HIRSH, D
影响因子：
46.9
作者：
Menzella, HG;Reid, R;Santi, DV
通讯作者：
Santi, DV
影响因子：
48
作者：
Williams, Richard;Peisajovich, Sergio G.;Griffiths, Andrew D.
通讯作者：
Griffiths, Andrew D.