Building Cre Knockin Rat Lines Using CRISPR/Cas9.
Building Cre Knockin Rat Lines Using CRISPR/Cas9.
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使用 CRISPR/Cas9 构建 Cre Knockin 大鼠系。
DOI：
10.1007/978-1-4939-7169-5_3
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Huang Xingxu
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ma Yuanwu;Zhang Lianfeng;Huang Xingxu
条件基因失活策略有助于研究人员研究胚胎发生或成年期特定组织中的关键基因功能。Cre/loxP系统广泛用于细胞或生物体中的条件性基因失活/激活。Cre基因敲入动物细胞系是基因表达或失活所必需的，在空间和时间上受到限制。然而，通过传统方法产生Cre敲入线是费力的。最近，成簇的规则间隔短回文重复序列和CRISPR相关蛋白9（CRISPR/Cas9）已被证明是一种简单有效的基因组编辑工具。我们已经使用CRISPR/Cas9系统通过将gRNA/Cas9/供体直接递送到受精卵中来产生在不同靶向基因座中携带Cre基因的大鼠品系。本文介绍了Cre基因敲入大鼠的建立过程，包括靶位点的选择、RNA的制备、模板供体的构建、原核注射和Cre基因精确插入的基因分型。综上所述，Cre基因敲入系的建立可在6周内完成。
Conditional gene inactivation strategy helps researchers to study the gene functions that are critical in embryogenesis or in defined tissues of adulthood. The Cre/loxP system is widely used for conditional gene inactivation/activation in cells or organisms. Cre knockin animal lines are essential for gene expression or inactivation in a spatially and temporally restricted manner. However, to generate a Cre knockin line by traditional approach is laborious. Recently, the clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated protein 9 (CRISPR/Cas9) has been proven as a simple and efficient genome-editing tool. We have used CRISPR/Cas9 system to generate rat strains that carry Cre genes in different targeted gene loci by direct delivery of gRNAs/Cas9/donors into fertilized eggs. Here, we described a stepwise procedure for the generation of Cre knockin rat, including target site selection, RNA preparation, the construction of the template donor, pronuclear injection, and the genotyping of precise Cre insertion in F0rats. Taken together, the establishment of Cre knockin line can be achieved within 6 weeks.
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影响因子：
64.5
作者：
Yang H;Wang H;Shivalila CS;Cheng AW;Shi L;Jaenisch R
通讯作者：
Jaenisch R
影响因子：
3.7
作者：
Kim JH;Lee SR;Li LH;Park HJ;Park JH;Lee KY;Kim MK;Shin BA;Choi SY
通讯作者：
Choi SY
DOI：
--
发表时间：
2013
期刊：
--
影响因子：
--
作者：
Woong Y. Hwang;Yanfang Fu;D. Reyon;Morgan L. Maeder;S. Tsai;Jeffry D. Sander;R. Peterson;J.-R. Joanna Yeh-J.
通讯作者：
Woong Y. Hwang;Yanfang Fu;D. Reyon;Morgan L. Maeder;S. Tsai;Jeffry D. Sander;R. Peterson;J.-R. Joanna Yeh-J.
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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