High-throughput T7 LIC vector for introducing C-terminal poly-histidine tags with variable lengths without extra sequences.
High-throughput T7 LIC vector for introducing C-terminal poly-histidine tags with variable lengths without extra sequences.
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DOI：
10.1016/j.pep.2008.09.005
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发表时间：
2009-01
影响因子：
1.6
通讯作者：
Kim, Sung-Hou
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lee, Jonas;Kim, Sung-Hou
关键词：
固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography，IMAC）是一种最常用的蛋白质纯化方法，用于在蛋白质的C-或N-末端添加六组氨酸标签（hexa-histidine tag，His-tag）的重组蛋白的纯化。然而，总有一些难处理的蛋白质与金属螯合树脂的结合力较弱，因此纯度较低。这些困难通常通过将His标签增加到8或10个组氨酸来克服。尽管它们取得了成功，但只有少数表达载体可用于容易地克隆和测试不同的His标签长度。因此，我们已经修改了大肠杆菌T7表达载体pET 21 a，以适应连接非依赖性克隆（LIC），这将允许容易和有效的平行克隆的靶基因与不同的His标签长度使用一个单一的插入。与大多数市售的LIC载体不同，我们的载体将不翻译不需要的额外序列，通过工程化N-末端接头以在开放阅读框之前退火，并且C-末端接头以作为His-标签退火。
Immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) has become one of the most popular protein purification methods for recombinant proteins with a hexa-histidine tag (His-tag) placed at the C- or N- terminus of proteins. Nevertheless, there are always difficult proteins that show weak binding to the metal chelating resin and thus low purity. These difficulties are often overcome by increasing the His-tag to 8 or 10 histidines. Despite their success, there are only few expression vectors available to easily clone and test different His-tag lengths. Therefore, we have modified Escherichia coli T7 expression vector pET21a to accommodate ligation-independent cloning (LIC) that will allow easy and efficient parallel cloning of target genes with different His-tag lengths using a single insert. Unlike most LIC vectors available commercially, our vectors will not translate unwanted extra sequences by engineering the N-terminal linker to anneal before the open reading frame, and the C-terminal linker to anneal as a His-tag.
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DOI：
10.1016/s1570-0232(02)00745-6
发表时间：
2003-03-25
影响因子：
3
作者：
Lemercier, G;Bakalara, N;Santarelli, X
通讯作者：
Santarelli, X
影响因子：
4.8
作者：
Rattenholl, A;Pappano, WN;Bruckner-Tuderman, L
通讯作者：
Bruckner-Tuderman, L
影响因子：
1.6
作者：
Glynou, K;Ioannou, PC;Christopoulos, TK
通讯作者：
Christopoulos, TK
DOI：
10.1007/s10969-005-1917-6
发表时间：
2005-09-01
期刊：
Journal of Structural and Functional Genomics
影响因子：
--
作者：
Grisshammer, Reinhard;White, Jim F.;Shiloach, Joseph
通讯作者：
Shiloach, Joseph
影响因子：
1.6
作者：
Mohanty, AK;Wiener, MC
通讯作者：
Wiener, MC