Selectivity in ISG15 and ubiquitin recognition by the SARS coronavirus papain-like protease.
Selectivity in ISG15 and ubiquitin recognition by the SARS coronavirus papain-like protease.
复制标题
SARS冠状病毒蛋白酶样蛋白酶的ISG15和泛素识别的选择性。
DOI：
10.1016/j.abb.2007.07.006
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发表时间：
2007-10-01
影响因子：
3.9
通讯作者：
Ménard R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lindner HA;Lytvyn V;Qi H;Lachance P;Ziomek E;Ménard R
严重急性呼吸综合征冠状病毒木瓜蛋白酶样蛋白酶（SARS-CoV PLpro）进行病毒复制酶多聚蛋白的N-末端加工，并且还在体外表现出Lys 48连接的多聚泛素链脱支和ISG 15前体加工活性。在这里，我们使用SDS-PAGE和基于荧光的测定来证明ISG 15衍生物是PLpro去泛素化活性的优选底物。kcat/KM为602，000 M−1 s−1，PLpro水解ISG 15-AMC的效率分别是Ub-AMC和Nedd 8-AMC的30倍和60倍。用截短的ISG 15和杂合Ub/ISG 15底物获得的数据表明，ISG 15的N-和C-末端Ub样结构域都有助于这种偏好。该酶还显示出对脱支Lys 48-超过Lys 63-连接的多聚泛素链的偏好。我们的研究结果表明，SARS-CoV PLpro可以区分泛素样修饰剂共享一个共同的C-末端序列，PLpro的脱支活性是连接类型选择性。本文还讨论了SARS-CoV PLpro特异性的潜在结构基础。
The severe acute respiratory syndrome coronavirus papain-like protease (SARS-CoV PLpro) carries out N-terminal processing of the viral replicase polyprotein, and also exhibits Lys48-linked polyubiquitin chain debranching and ISG15 precursor processing activities in vitro. Here, we used SDS–PAGE and fluorescence-based assays to demonstrate that ISG15 derivatives are the preferred substrates for the deubiquitinating activity of the PLpro. With kcat/KM of 602,000 M−1 s−1, PLpro hydrolyzes ISG15-AMC 30- and 60-fold more efficiently than Ub-AMC and Nedd8-AMC, respectively. Data obtained with truncated ISG15 and hybrid Ub/ISG15 substrates indicate that both the N- and C-terminal Ub-like domains of ISG15 contribute to this preference. The enzyme also displays a preference for debranching Lys48- over Lys63-linked polyubiquitin chains. Our results demonstrate that SARS-CoV PLpro can differentiate between ubiquitin-like modifiers sharing a common C-terminal sequence, and that the debranching activity of the PLpro is linkage type selective. The potential structural basis for the demonstrated specificity of SARS-CoV PLpro is discussed.
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