A plate-based assay system for analyses and screening of the Leishmania major inositol phosphorylceramide synthase.
A plate-based assay system for analyses and screening of the Leishmania major inositol phosphorylceramide synthase.
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用于分析和筛选利什曼原虫主要肌醇磷酸神经酰胺合酶的基于板的测定系统。
DOI：
10.1016/j.biocel.2010.06.008
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发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Mina JG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mina JG
鞘脂是真核生物膜，尤其是质膜的关键成分。形成这些脂质的生物合成途径在很大程度上是保守的。然而，与产生鞘磷脂的哺乳动物不同，病原真菌和原生动物等生物合成肌醇磷酸化神经酰胺（IPC）作为主要的磷脂。其中的关键步骤是由IPC合成酶催化神经酰胺和磷脂酰肌醇的反应，IPC合成酶是酵母中AUR1基因编码的一种必需酶，在哺乳动物中没有等效酶，最近在致病性动体原生动物中发现了功能同源物。因此，这种酶代表了一种新的抗真菌和抗原虫药物的有希望的靶点。由于缺乏对着丝体疾病（如利什曼病）的有效治疗，有必要对原生动物酶进行表征。为此，建立了96孔板格式的利什曼原虫主要IPC合酶的荧光无细胞测定方案。在此体系下，酶的动力学参数符合双位移模型，表观Vmax=2.31pmolmin−1U−1。此外，抑制底物类似物已被确定。重要的是，该分析适合于开发用于铅抑制剂的高通量筛选应用，因此可能被证明是药物发现的关键工具。
Sphingolipids are key components of eukaryotic membranes, particularly the plasma membrane. The biosynthetic pathway for the formation of these lipid species is largely conserved. However, in contrast to mammals, which produce sphingomyelin, organisms such as the pathogenic fungi and protozoa synthesize inositol phosphorylceramide (IPC) as the primary phosphosphingolipid. The key step involves the reaction of ceramide and phosphatidylinositol catalysed by IPC synthase, an essential enzyme with no mammalian equivalent encoded by the AUR1 gene in yeast and recently identified functional orthologues in the pathogenic kinetoplastid protozoa. As such this enzyme represents a promising target for novel anti-fungal and anti-protozoal drugs. Given the paucity of effective treatments for kinetoplastid diseases such as leishmaniasis, there is a need to characterize the protozoan enzyme. To this end a fluorescent-based cell-free assay protocol in a 96-well plate format has been established for the Leishmania major IPC synthase. Using this system the kinetic parameters of the enzyme have been determined as obeying the double displacement model with apparent Vmax=2.31pmolmin−1U−1. Furthermore, inhibitory substrate analogues have been identified. Importantly this assay is amenable to development for use in high-throughput screening applications for lead inhibitors and as such may prove to be a pivotal tool in drug discovery.
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DOI：
10.1016/j.bbagen.2007.09.009
发表时间：
2008-03-01
影响因子：
3
作者：
Suzuki, Erika;Tanaka, Arneria K.;Takahashi, Hello K.
通讯作者：
Takahashi, Hello K.
酶活性单位
DOI：
--
发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
--
作者：
Vynohradova Rp
通讯作者：
Vynohradova Rp
aureobasidin A 抑制亚马逊利什曼原虫 (Leishmania) 的生长和感染性。
影响因子：
5.2
作者：
A. K. Tanaka;V. B. Valero;Hélio K. Takahashi;A. H. Straus
通讯作者：
A. H. Straus
影响因子：
3.9
作者：
Bromley, PE;Li, YNO;Lynch, DV
通讯作者：
Lynch, DV
影响因子：
3.2
作者：
BECKER, GW;LESTER, RL
通讯作者：
LESTER, RL