Individual organelle pH determinations of magnetically enriched endocytic organelles via laser-induced fluorescence detection.
Individual organelle pH determinations of magnetically enriched endocytic organelles via laser-induced fluorescence detection.
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通过激光诱导荧光检测对磁性富集的内吞细胞器的单个细胞器 pH 值进行测定。
DOI：
10.1021/ac201196n
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发表时间：
2011
影响因子：
7.4
通讯作者：
Arriaga,EdgarA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Satori,ChadP;Kostal,Vratislav;Arriaga,EdgarA
分析溶酶体和其他内吞细胞器中发生的生物转化对于研究细胞内降解、营养再循环和溶酶体贮积症至关重要。这种分析需要没有其他污染细胞器的生物活性细胞器制备物。常用的差速离心技术产生不纯的级分，并且可能与微尺度分离平台不兼容。密度梯度离心程序可降低杂质水平，但可能损害生物活性。在这里，我们报告了简单的磁性设置和一个程序，该程序根据生物活性细胞器在穿过开放管时的磁性捕获来产生高度富集的生物活性细胞器。捕获后，在线激光诱导荧光检测（LIF）确定的第一次每个磁性保留的个人内吞细胞器的pH值。与批量测量不同，该方法适用于描述用葡聚糖包被的氧化铁纳米颗粒（用于磁性保留）和荧光素/TMRM缀合的葡聚糖（用于LIF的pH测量）处理的L 6大鼠成肌细胞内吞细胞器中pH值的分布。它们各自的pH值范围为4至6，这是典型的生物活性内吞细胞器。这些分析方法对于评价老化、胆积症和药物开发中溶酶体相关降解途径具有高度相关性。
The analysis of biotransformations that occur in lysosomes and other endocytic organelles is critical to studies on intracellular degradation, nutrient recycling, and lysosomal storage disorders. Such analyses require bioactive organelle preparations that are devoid of other contaminating organelles. Commonly used differential centrifugation techniques produce impure fractions and may not be compatible with microscale separation platforms. Density gradient centrifugation procedures reduce the level of impurities but may compromise bioactivity. Here we report on simple magnetic setup and a procedure that produce highly enriched bioactive organelles based on their magnetic capture as they traveled through open tubes. Following capture, in-line laser-induced fluorecence detection (LIF) determined for the first time the pH of each magnetically retained individual endocytic organelle. Unlike bulk measurements, this method was suitable to describe the distributions of pH values in endocytic organelles from L6 rat myoblasts treated with dextran-coated iron oxide nanoparticles (for magnetic retention) and fluorescein/TMRM-conjugated dextran (for pH measurements by LIF). Their individual pH values ranged from 4 to 6, which is typical of bioactive endocytic organelles. These analytical procedures are of high relevance to evaluate lysosomal-related degradation pathways in aging, storage disorders, and drug development.
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通过分位数分析评估单个颗粒毛细管电泳实验。
DOI：
10.1016/j.chroma.2007.04.065
发表时间：
2007
期刊：
Journal of chromatography. A
影响因子：
--
作者：
Whiting,ChristoferE;Arriaga,EdgarA
通讯作者：
Arriaga,EdgarA
影响因子：
4.9
作者：
Duvvuri, Muralikrishna;Krise, Jeffrey P.
通讯作者：
Krise, Jeffrey P.
影响因子：
32.4
作者：
Tomasello, E;Desmoulins, PO;Vivier, E
通讯作者：
Vivier, E
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DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Rodriguez-Paris,JM;Nolta,KV;Steck,TL
通讯作者：
Steck,TL
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DOI：
--
发表时间：
2010
期刊：
In Analysis
影响因子：
--
作者：
Shao;Xiaodong Yu;Jingjuan Xu;Hongyuan Chen
通讯作者：
Hongyuan Chen