Gene cassette knock-in in mammalian cells and zygotes by enhanced MMEJ.
Gene cassette knock-in in mammalian cells and zygotes by enhanced MMEJ.
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DOI：
10.1186/s12864-016-3331-9
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发表时间：
2016-11-28
期刊：
影响因子：
4.4
通讯作者：
Tanaka K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Aida T;Nakade S;Sakuma T;Izu Y;Oishi A;Mochida K;Ishikubo H;Usami T;Aizawa H;Yamamoto T;Tanaka K
虽然CRISPR/Cas实现了一步基因盒敲入，但组装包含长同源臂的靶向载体对于高通量敲入来说是一个繁琐的过程。我们最近开发了基于CRISPR/Cas的精确整合到靶染色体(Pitch)系统中，用于微同源介导的末端连接介导的无长同源臂的基因盒敲入。在这里，我们确定外切核酸酶1(Exo1)是人类细胞中的螺距增强子。通过将Exo1和节距定向的供体载体相结合，我们实现了在人类细胞和小鼠受精卵中方便的一步敲入基因盒和等位基因。我们的研究成果为高通量敲入提供了技术平台。本文的在线版本(doi：10.1186/s12864-0163331-9)包含补充材料，授权用户可以使用。
Although CRISPR/Cas enables one-step gene cassette knock-in, assembling targeting vectors containing long homology arms is a laborious process for high-throughput knock-in. We recently developed the CRISPR/Cas-based precise integration into the target chromosome (PITCh) system for a gene cassette knock-in without long homology arms mediated by microhomology-mediated end-joining. Here, we identified exonuclease 1 (Exo1) as an enhancer for PITCh in human cells. By combining the Exo1 and PITCh-directed donor vectors, we achieved convenient one-step knock-in of gene cassettes and floxed allele both in human cells and mouse zygotes. Our results provide a technical platform for high-throughput knock-in. The online version of this article (doi:10.1186/s12864-016-3331-9) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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DOI：
10.4161/cc.7.18.6679
发表时间：
2008-09-15
期刊：
Cell cycle (Georgetown, Tex.)
影响因子：
--
作者：
Mao Z;Bozzella M;Seluanov A;Gorbunova V
通讯作者：
Gorbunova V
DOI：
10.1016/j.tig.2008.08.007
发表时间：
2008-11
期刊：
Trends in genetics : TIG
影响因子：
--
作者：
McVey M;Lee SE
通讯作者：
Lee SE
影响因子：
4.6
作者：
Mashimo, Tomoji;Kaneko, Takehito;Sakuma, Tetsushi;Kobayashi, Junya;Kunihiro, Yayoi;Voigt, Birger;Yamamoto, Takashi;Serikawa, Tadao
通讯作者：
Serikawa, Tadao
DOI：
10.1038/nrm3738
发表时间：
2014-02
期刊：
Nature reviews. Molecular cell biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
4.6
作者：
Hisano Y;Sakuma T;Nakade S;Ohga R;Ota S;Okamoto H;Yamamoto T;Kawahara A
通讯作者：
Kawahara A