Affinity Chromatography of Tryptases: Design, Synthesis and Characterization of a Novel Matrix‐Bound Bivalent Inhibitor
Affinity Chromatography of Tryptases: Design, Synthesis and Characterization of a Novel Matrix‐Bound Bivalent Inhibitor
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类胰蛋白酶的亲和色谱：新型基质结合二价抑制剂的设计、合成和表征
DOI：
10.1002/cbic.200400217
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发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
Sommerhoff
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schaschke;Gabrijelcic-Geiger;Dominik;Sommerhoff
β-类胰蛋白酶是肥大细胞来源的丝氨酸蛋白酶，是一种具有酶活性的寡聚体，由四个亚基组成，每个亚基都具有胰蛋白酶样的活性。活性中心裂隙指向四聚体的中心孔，形成四个带负电荷的S1结合口袋的空间阵列。因此，合适几何构型的二碱性抑制剂可以以二价方式与相邻的亚基结合。我们最近发现了一种有效的二价抑制剂(Ki=18 nM)，它基于双功能支架环-(-D-天冬氨酸-L-天冬氨酸-)和精氨酸亚甲基-3-氨基甲基苯丙氨酸甲酯作为S1口袋的配体，利用了这一独特的四聚体几何结构。为了产生亲和基质，通过使用聚乙二醇衍生物Jeffamine ED 900作为间隔物，将二价配体修饰并固定在琼脂糖基质上。这种基质选择性地识别和结合粗蛋白混合物中的β-类胰蛋白酶，因此是一种有用的几何驱动的方法来分离和纯化人肥大细胞类胰蛋白酶。
β‐Tryptases are mast cell‐derived serine proteases that are enzymatically active in the form of an oligomer consisting of four subunits each with trypsin‐like activity. The active‐site clefts, which are directed toward the central pore of the tetramer, form spatial arrays of four negatively charged S1 binding pockets. Therefore, dibasic inhibitors of appropriate geometry can bind in a bivalent fashion to neighboring subunits. We have recently identified a potent bivalent inhibitor (Ki=18 nM), based on the bifunctional scaffold cyclo‐(‐D‐Asp‐L‐Asp‐) and the arginine mimeticdl‐3‐aminomethyl‐phenylalanine methyl ester as a ligand for S1 pockets that takes advantage of the this unique tetrameric geometry. To generate an affinity matrix, the bivalent ligand was modified and immobilized on a Sepharose matrix by use of the PEG derivative Jeffamine ED 900 as spacer. This matrix selectively recognizes and binds β‐tryptase from crude protein mixtures and thus is useful as a geometry‐driven means of isolating and purifying human mast cell tryptases.
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