A single-molecule localization microscopy method for tissues reveals nonrandom nuclear pore distribution in Drosophila.
A single-molecule localization microscopy method for tissues reveals nonrandom nuclear pore distribution in Drosophila.
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一种组织的单分子定位显微镜方法揭示了果蝇核孔的非随机分布。
DOI：
10.1242/jcs.259570
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发表时间：
2021-12-15
影响因子：
4
通讯作者：
St Johnston D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cheng J;Allgeyer ES;Richens JH;Dzafic E;Palandri A;Lewków B;Sirinakis G;St Johnston D
单分子定位显微镜（SMLM）可以在薄样品中提供纳米级分辨率，但由于离焦发射器和光学像差的高背景，很少应用于组织。在这里，我们描述了一个线扫描显微镜，提供光学切片SMLM组织。在该系统上使用DNA和肽点累积在纳米级形貌（PAINT）中成像的内源性标记的核孔蛋白和F-肌动蛋白成像通常在大于20 μm的深度处提供30 nm或更好的分辨率。 这揭示了核孔在大多数果蝇组织中是非随机分布的，与培养细胞中所见相反。核纤层蛋白Dm 0与核孔互补定位，表明它对核孔起着补充作用。此外，异位表达的组织特异性核纤层蛋白C的核孔分布更随机，而核纤层蛋白C突变体增强核孔集群，特别是在肌肉细胞核。鉴于核孔蛋白与特定的染色质结构域相互作用，核孔簇集可以调节局部染色质组织并有助于由人核纤层蛋白A/C核纤层蛋白病引起的疾病表型。摘要：描述了一种简单的线扫描显微镜，用于使用DNA-PAINT进行组织的超分辨率成像。这揭示了大多数果蝇细胞类型中核孔的非随机分布。
Single-molecule localization microscopy (SMLM) can provide nanoscale resolution in thin samples but has rarely been applied to tissues because of high background from out-of-focus emitters and optical aberrations. Here, we describe a line scanning microscope that provides optical sectioning for SMLM in tissues. Imaging endogenously-tagged nucleoporins and F-actin on this system using DNA- and peptide-point accumulation for imaging in nanoscale topography (PAINT) routinely gives 30 nm resolution or better at depths greater than 20 µm. This revealed that the nuclear pores are nonrandomly distributed in most Drosophila tissues, in contrast to what is seen in cultured cells. Lamin Dm0 shows a complementary localization to the nuclear pores, suggesting that it corrals the pores. Furthermore, ectopic expression of the tissue-specific Lamin C causes the nuclear pores to distribute more randomly, whereas lamin C mutants enhance nuclear pore clustering, particularly in muscle nuclei. Given that nucleoporins interact with specific chromatin domains, nuclear pore clustering could regulate local chromatin organization and contribute to the disease phenotypes caused by human lamin A/C laminopathies. Summary: Description of a simple line scanning microscope for super-resolution imaging of tissues using DNA-PAINT. This reveals a non-random distribution of nuclear pores in most Drosophila cell-types.
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影响因子：
16.6
作者：
Cetera M;Ramirez-San Juan GR;Oakes PW;Lewellyn L;Fairchild MJ;Tanentzapf G;Gardel ML;Horne-Badovinac S
通讯作者：
Horne-Badovinac S
DOI：
10.1126/science.1199424
发表时间：
2011-02-25
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Haigo SL;Bilder D
通讯作者：
Bilder D
影响因子：
15
作者：
Cordes, Thorben;Vogelsang, Jan;Tinnefeld, Philip
通讯作者：
Tinnefeld, Philip
影响因子：
4.6
作者：
Dialynas, George;Speese, Sean;Wallrath, Lori L.
通讯作者：
Wallrath, Lori L.
优化单分子定位显微镜的成像速度和激发强度。
影响因子：
48
作者：
Diekmann R;Kahnwald M;Schoenit A;Deschamps J;Matti U;Ries J
通讯作者：
Ries J