Methods for Expression, Purification, and Characterization of PqqE, a Radical SAM Enzyme in the PQQ Biosynthetic Pathway.
Methods for Expression, Purification, and Characterization of PqqE, a Radical SAM Enzyme in the PQQ Biosynthetic Pathway.
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DOI：
10.1016/bs.mie.2018.04.002
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发表时间：
2018
影响因子：
--
通讯作者：
Klinman JP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhu W;Martins AM;Klinman JP
PqqE是氧化还原辅因子吡咯喹啉醌（PQQ）生物合成途径中的第一种酶，催化前体肽PqqA中碳-碳键的形成。PqqE是一种自由基S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）（RS）酶，是一种利用[4Fe-4S]簇结合SAM分子的还原裂解产生5′-脱氧腺苷自由基的酶家族。然后，这种自由基被用来引发一系列反应，否则这些反应不太可能发生。PqqE是RS酶亚家族的创始成员，除了SAM [4Fe-4S]簇外，还具有含有额外辅助Fe-S簇的SPASM结构域。大多数自由基SAM酶对氧高度敏感，这会破坏它们的Fe-S簇。这在使用这些酶时可能会造成一些限制，因为大多数工作必须在厌氧条件下进行。在这里，我们总结了我们实验室开发的表达和纯化PqqE的方法。我们还强调了几种方法，我们已经用于表征的酶。
PqqE is the first enzyme in the biosynthetic pathway of the redox cofactor pyrroloquinoline quinone (PQQ), catalyzing the formation of a carbon–carbon bond in the precursor peptide PqqA. PqqE is a radical S-adenosyl-l-methionine (SAM) (RS) enzyme, a family of enzymes that use the reductive cleavage of a [4Fe–4S] cluster-bound SAM molecule to generate a 5′-deoxyadenosyl radical. This radical is then used to initiate an array of reactions that otherwise would be unlikely to occur. PqqE is a founding member of a subset family of RS enzymes that, additionally to the SAM [4Fe–4S] cluster, have a SPASM domain containing additional, auxiliary Fe–S clusters. Most radical SAM enzymes are highly sensitive to oxygen, which destroys their Fe–S clusters. This can pose several limitations when working with these enzymes, since most of the work has to be done under anaerobic conditions. Here, we summarize the methods developed in our lab for the expression and purification of PqqE. We also highlight the several methods we have used for the characterization of the enzyme.
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编码细菌辅因子吡咯喹啉醌生物合成的基因的分布和特性。
影响因子：
2.9
作者：
Shen, Yao-Qing;Bonnot, Florence;Imsand, Erin M.;RoseFigura, Jordan M.;Sjoelander, Kimmen;Klinman, Judith P.
通讯作者：
Klinman, Judith P.
影响因子：
2.6
作者：
Saichana N;Tanizawa K;Ueno H;Pechoušek J;Novák P;Frébortová J
通讯作者：
Frébortová J
影响因子：
4.4
作者：
Beeson, William T.;Iavarone, Anthony T.;Marletta, Michael A.
通讯作者：
Marletta, Michael A.
DOI：
10.1016/0304-4165(91)90082-r
发表时间：
1991-09-02
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA
影响因子：
--
作者：
MCKENNA, CE;GUTHEIL, WG;WEI, S
通讯作者：
WEI, S
影响因子：
3
作者：
Banci, Lucia;Ciofi-Baffoni, Simone;Pandelia, Maria-Eirini
通讯作者：
Pandelia, Maria-Eirini