A fluorescence imaging based-assay to monitor mitophagy in cultured hepatocytes and mouse liver.
A fluorescence imaging based-assay to monitor mitophagy in cultured hepatocytes and mouse liver.
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一种基于荧光成像的检测培养肝细胞和小鼠肝脏中线粒体自噬的方法。
DOI：
10.1016/j.livres.2020.12.002
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发表时间：
2021-03
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ding WX
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ma X;Ding WX
线粒体自噬是一种溶酶体降解途径，可选择性去除受损、老化和功能失调的线粒体。线粒体自噬的最新进展强调了它在各种生理和病理条件，包括肝脏疾病中的重要性。然而，可靠的定量分析，以监测培养细胞和组织中的线粒体自噬仍然是稀缺的。我们描述了一个详细的协议，用于监测原代培养的肝细胞和小鼠肝脏线粒体自噬使用细胞色素C氧化酶亚基8（Cox 8）增强的绿色荧光蛋白（EGFP）-mCherry，双色荧光成像方法。由于合并的EGFP和mCherry信号，线粒体以黄色荧光可视化。相比之下，由于酸性区室中EGFP绿色荧光的淬灭，自溶体封闭的线粒体显示为红色斑点。量化每个细胞中仅红色斑点的数量可以获得线粒体自噬的定量测量。Cox 8-EGFP-mCherry检测可特异性靶向线粒体，用于体内外线粒体自噬监测。
Mitophagy is a lysosomal degradation pathway that selectively removes damaged, aged and dysfunctional mitochondria. Recent advances in understanding mitophagy highlight its importance in various physiological and pathological conditions including liver diseases. However, reliable quantitative assays to monitor mitophagy in cultured cells and in tissues are still scarce. We describe a detailed protocol for monitoring mitophagy in primary cultured hepatocytes and mouse livers using cytochrome C oxidase subunit 8 (Cox8)-enhanced green fluorescent protein (EGFP)-mCherry, a dual color fluorescence based-imaging method. Mitochondria are visualized in yellow fluorescence due to the merged EGFP and mCherry signal. In contrast, autolysosome enclosed mitochondria are shown as red puncta due to quenching of EGFP green fluorescence in acidic compartments. Quantifying the number of red-only puncta in each cell can obtain a quantitative measure for mitophagy. Cox8-EGFP-mCherry assay can specifically target to mitochondria and be used to monitor mitophagy in vitro and in vivo.
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影响因子：
9.3
作者：
Williams JA;Ding WX
通讯作者：
Ding WX
影响因子：
16.2
作者：
Pickrell AM;Youle RJ
通讯作者：
Youle RJ
影响因子：
5.6
作者：
Yoshii SR;Mizushima N
通讯作者：
Mizushima N
DOI：
10.1083/jcb.201603039
发表时间：
2016-08-01
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
McWilliams TG;Prescott AR;Allen GF;Tamjar J;Munson MJ;Thomson C;Muqit MM;Ganley IG
通讯作者：
Ganley IG
影响因子：
3.5
作者：
Hong, Xiaoqi;Liu, Jie;Huang, Fang
通讯作者：
Huang, Fang