Quantification of DNA-associated proteins inside eukaryotic cells using single-molecule localization microscopy.
Quantification of DNA-associated proteins inside eukaryotic cells using single-molecule localization microscopy.
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DOI：
10.1093/nar/gku726
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发表时间：
2014-10-29
影响因子：
14.9
通讯作者：
Carr AM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Etheridge TJ;Boulineau RL;Herbert A;Watson AT;Daigaku Y;Tucker J;George S;Jönsson P;Palayret M;Lando D;Laue E;Osborne MA;Klenerman D;Lee SF;Carr AM
单分子定位显微镜技术的发展使得细胞内的定位精度达到纳米级，从而能够分辨率超精细的细胞结构并阐明关键的分子机制。应用这些方法来了解 DNA 复制和修复的过程仅限于定义的体外生化分析和原核细胞。为了将这些技术扩展到真核系统，我们进一步开发了一种基于光激活定位显微镜的方法，可以直接可视化未固定的真核细胞中的 DNA 相关蛋白。我们证明，由于蛋白质扩散性导致的荧光运动模糊可用于选择性地对 DNA 结合的蛋白质群进行成像。我们设计并测试了一种简单的方法，并表明它可用于检测复制解旋酶亚基 Mcm4 和复制滑动钳 PCNA 在细胞周期不同阶段和不同遗传背景之间 DNA 结合的变化。
Development of single-molecule localization microscopy techniques has allowed nanometre scale localization accuracy inside cells, permitting the resolution of ultra-fine cell structure and the elucidation of crucial molecular mechanisms. Application of these methodologies to understanding processes underlying DNA replication and repair has been limited to defined in vitro biochemical analysis and prokaryotic cells. In order to expand these techniques to eukaryotic systems, we have further developed a photo-activated localization microscopy-based method to directly visualize DNA-associated proteins in unfixed eukaryotic cells. We demonstrate that motion blurring of fluorescence due to protein diffusivity can be used to selectively image the DNA-bound population of proteins. We designed and tested a simple methodology and show that it can be used to detect changes in DNA binding of a replicative helicase subunit, Mcm4, and the replication sliding clamp, PCNA, between different stages of the cell cycle and between distinct genetic backgrounds.
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影响因子：
56.9
作者：
Elf, Johan;Li, Gene-Wei;Xie, X. Sunney
通讯作者：
Xie, X. Sunney
DOI：
10.1103/physreve.85.061916
发表时间：
2012-06
期刊：
Physical review. E, Statistical, nonlinear, and soft matter physics
影响因子：
--
作者：
Michalet X;Berglund AJ
通讯作者：
Berglund AJ
影响因子：
11.4
作者：
Kearsey, SE;Montgomery, S;Lindner, K
通讯作者：
Lindner, K
影响因子：
2.6
作者：
Hentges, P;Van Driessche, B;Carr, AM
通讯作者：
Carr, AM
影响因子：
48
作者：
Tokunaga, Makio;Imamoto, Naoko;Sakata-Sogawa, Kumiko
通讯作者：
Sakata-Sogawa, Kumiko