Mutagenesis of the murine hepatitis virus nsp1-coding region identifies residues important for protein processing, viral RNA synthesis, and viral replication.
Mutagenesis of the murine hepatitis virus nsp1-coding region identifies residues important for protein processing, viral RNA synthesis, and viral replication.
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DOI：
10.1016/j.virol.2005.06.035
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发表时间：
2005-09-30
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Denison MR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Brockway SM;Denison MR
尽管冠状病毒复制机制的研究仍在进行中，但许多病毒非结构蛋白的功能仍不清楚。在目前的研究中，反向遗传学的方法被用来定义的作用，28 kDa的氨基末端产物（nsp 1）的基因1多蛋白在复制过程中的冠状病毒鼠肝炎病毒（MHV）在细胞培养。为了确定nsp1是否是MHV复制所必需的，并确定蛋白质功能的关键残基，产生了在nsp1编码区内含有缺失或点突变的突变病毒，并测定了病毒复制、病毒蛋白表达、蛋白定位和RNA合成的缺陷。结果表明，nsp 1的羧基末端的一半（残基K124至L241）是在培养中的病毒复制所必需的，但需要从基因1多蛋白的nsp 1的有效的蛋白水解切割和最佳的病毒复制。此外，虽然缺失K124氨基末端的nsp1残基未能产生感染性病毒，但nsp1氨基末端的点突变允许恢复几种复制和RNA合成改变的突变体。这项研究确定了nsp1残基对蛋白质加工，病毒RNA合成和病毒复制的重要性。
Despite ongoing research investigating mechanisms of coronavirus replication, functions of many viral nonstructural proteins (nsps) remain unknown. In the current study, a reverse genetic approach was used to define the role of the 28-kDa amino-terminal product (nsp1) of the gene 1 polyprotein during replication of the coronavirus murine hepatitis virus (MHV) in cell culture. To determine whether nsp1 is required for MHV replication and to identify residues critical for protein function, mutant viruses that contained deletions or point mutations within the nsp1-coding region were generated and assayed for defects in viral replication, viral protein expression, protein localization, and RNA synthesis. The results demonstrated that the carboxy-terminal half of nsp1 (residues K124 through L241) was dispensable for virus replication in culture but was required for efficient proteolytic cleavage of nsp1 from the gene 1 polyprotein and for optimal viral replication. Furthermore, whereas deletion of nsp1 residues amino-terminal to K124 failed to produce infectious virus, point mutagenesis of the nsp1 amino-terminus allowed recovery of several mutants with altered replication and RNA synthesis. This study identifies nsp1 residues important for protein processing, viral RNA synthesis, and viral replication.
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