A Single-Molecule View of Initial Transcription

初始转录的单分子视图

• 批准号: 160709046
• 负责人: Professor Dr. Thorben Cordes
• 金额: --
• 依托单位: Clarendon Laboratory
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2008-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/160709046?language=en
• 关键词: Single; Molecule; View; Initial; Transcription

Das übergeordnete Ziel des vorliegenden Antrages ist eine Untersuchung der initialen Phase der Gentranskription, also der Transformation genetischer Information von DNA zu RNA, auf der Ebene von einzelnen Molekülen. Transiente Intermediate und konformelle Änderungen des Proteins RNA Polymerase, welches die Gentranskription ausführt, sollen mit Hilfe von modernsten Techniken der Einzelmolekülfluoreszenzspektroskopie in Kombination mit nanometer-genauen Methoden zur Abstandsmessung (basierend auf Fluoreszenz-Resonanz- Energie-Transfer, FRET) untersucht werden. Mit diesen Techniken ist man in der Lage, die initialen Schritte der Gentranskription in Echtzeit zu beobachten (z.B. konformelle Änderungen in RNA Polymerase während der Addition einer einzelnen Nukleobase an die RNA Kette), um so die statischen Bilder des Transkriptionsprozesses aus der Röntgenbeugung zu ergänzen und zu verfeinern. Die konkreten Ziele des vorliegenden Antrages sind die Entwicklung von FRET basierten Untersuchungsmethoden (“FRET-assays“) für die Echtzeit-Beobachtung von Transkription in vitro. Es soll dabei die Öffnung der abgelesenen DNA und das Verlassen des sogenannten “promoters“ beobachtet werden. Weiterhin sollen die Einflüsse verschiedener DNA-Sequenzen auf ratenbestimmende Schritte der Transkription (“promoter-proximal pausing“) untersucht werden. Schlussendlich sollen die Untersuchungsmethoden oder “FRET-assays“ auch in lebenden bakteriellen Zellen angewandt werden. Die geplanten Arbeiten werden somit zu einem grundlegenden Verständnis der initialen Transkription beitragen, das in Zukunft auch auf höhere Organismen – wie den Menschen – übertragen werden könnte. Die zu entwickelnden Untersuchungsmethoden könnten zukünftig aber auch für das Studium anderer wichtiger Protein-DNA Wechselwirkungen in vitro und in vivo Verwendung finden.

遗传转化的初始阶段，以及DNA到RNA的遗传转化信息，都是分子遗传学的重要组成部分。蛋白质RNA聚合酶的瞬时中间体和结构，以及基因转录，可以通过现代分子荧光光谱技术和纳米共振能量转移（FRET）方法的结合来实现。技术是人在拉格中的一种，它是人类在理解时代中的一种原始书写方式。konformelle Änderungen in RNA Polymerase während der Addition einer einzelnen Nuklebase an die RNA Kette），um so die statischen Bilder des Transkriptionsprozesses aus der Röntgenbeugung zu ergänzen und zu verfeinern. Die konkreten Ziele des vorliegenden Antrages sind die Entwicklung von FRET baserten Untersuchungsmethoden（“FRET-assays”）für die Echtzeit-Beobachtung von transskription in vitro.因此，必须对DNA进行扩增，并对韦尔登进行检测。此外，还需要通过对转录速率的测定来验证DNA测序（“启动子近端暂停”）是否可用于韦尔登。Schlussendlich sollen the Untersuchungsmethoden or der“FRET-assays”auch in lebenden bakteriellen Zellen angewandt韦尔登.劳动者的韦尔登是一种基本的翻译形式，它也是组织者的一种形式--就像人类的韦尔登一样。该研究方法也可用于研究蛋白质-DNA在体外和体内的相互作用。