Studies of light-induced structural changes in phytochrome using spin-label electron-electron double resonance

利用自旋标记电子-电子双共振研究光敏色素的光诱导结构变化

基本信息

项目摘要

Phytochromes are widespread photoreceptors with a bilin chromophore. These chromoproteins exist in two spectrally distinct forms, named Pr and Pfr. In this project we will study bacterial phytochrome Agp1 from Agrobacterium tumefaciens. Like many other bacterial phytochromes, Agp1 is a light-regulated histidine kinase. We plan to examine light-induced protein conformational changes of full-length Agp1 by using nitroxide-spin label electron paramagnetic resonance (EPR) techniques. The nitroxide label will be covalently attached to cysteine residues that are incorporated by site-directed mutagenesis. By measuring distances between spin labels using pulsed electron-electron double resonance (ELDOR), information on the arrangement of subunits within the dimer will be obtained. These measurements will provide insight into intramolecular signal transduction as well as structural information on a full-length phytochrome.
光敏色素是一种广泛存在的光感受器,具有胆林生色团。这些色素蛋白以两种光谱不同的形式存在,分别称为Pr和Pfr。在本项目中,我们将研究来自根癌农杆菌的细菌光敏色素Agp1。像许多其他细菌光敏色素一样,Agp1是一种光调节的组氨酸激酶。我们计划利用氮氧化物-自旋标记电子顺磁共振(EPR)技术来检测全长Agp1在光诱导下的蛋白质构象变化。氮氧化物标记将共价连接到半胱氨酸残基上,这些残基通过定点突变结合在一起。通过使用脉冲电子-电子双共振(ELDOR)测量自旋标记之间的距离,将获得关于二聚体内亚基排列的信息。这些测量将提供分子内信号转导以及全长光敏色素的结构信息。

项目成果

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