Präparation semi-synthetischer Proteine durch ein neuartiges trans-spleißendes Intein

使用新型反式剪接内含肽制备半合成蛋白质

• 批准号: 22175865
• 负责人: Professor Dr. Henning D. Mootz
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Units
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/22175865?language=en
• 关键词: Pr; paration; semi; synthetischer; Proteine

Inteine knüpfen Peptidbindungen zwischen zwei beliebigen Polypeptiden, die als N- und C-Exteine mit der Inteindomäne fusioniert sind. Wir haben ein neuartiges gespaltenes Intein entwickelt, dessen N-terminaler Teil aus lediglich 11 Aminosäuren besteht und mittels Peptidfestphasensynthese präpariert werden kann. Durch Protein-trans-Spleißen kann so ein synthetisches Peptid chemo- und regioselektiv an den N-Terminus eines rekombinanten Protein verknüpft werden. Damit entfällt gegenüber herkömmlichen Methoden die Notwendigkeit zur Synthese eines C-terminalen Thioesters, Auf diese Weise werden funktionale chemisch-biologische Hybridverbindungen synthetisiert. In diesem Projekt sollen die Reaktionsbedingungen für das gespaltene Intein weiter optimiert, die Verträglichkeit verschiedener chemischer Funktionalitäten im synthetischen Peptid getestet und die Affinität zwischen den beiden Inteinteilen durch ein Fluorescence-resonance-energy-transfer (FRET)-Assay bestimmt werden. Ebenfalls mit FRET-Techniken sollen verschiedene Konformationszustände von nichtribosomalen Peptidsynthetasenfragmenten untersucht werden, um strukturelle und dynamische Einblicke in die Mechanismen dieser multimodularen Synthesemaschinen zu gewinnen. Die geeigneten Fluorophorsonden werden durch die neue Technik des Protein-trans-Spleißens und andere Methoden in die Proteine eingebaut.

Inteine knupfen Peptidindungen zwischen zwei beliebigen Polypeptiden，die als N-and C-Exteine mit der Inteindomäne fusioniert sind.我们有一个中性的内含物，从11个最好的氨基和最好的肽相合成的N-末端蛋白可以进行韦尔登合成。反式胰蛋白酶可以合成一种化学和区域选择性肽，并在N-末端合成一种可用于韦尔登的重组蛋白。本文介绍了一种合成C-末端硫代酯的有效方法，即利用韦尔登功能性化学-生物杂化物的合成方法。在该项目中，通过荧光共振能量转移（FRET）测定法，验证了合成肽的化学功能和亲和性。利用FRET技术可解决非特异性肽合成酶片段的构象变化问题，使韦尔登片段在多模块化合成机械中具有结构和动力学特征。荧光素韦尔登的产生是通过新的蛋白质反式剪接技术和蛋白质合成方法实现的。

项目成果

Biochemical evidence for conformational changes in the cross‐talk between adenylation and peptidyl‐carrier protein domains of nonribosomal peptide synthetases

非核糖体肽合成酶的腺苷酸化和肽基载体蛋白结构域之间的串扰构象变化的生化证据

• DOI: 10.1111/j.1742-4658.2009.07551.x
• 发表时间: 2010
• 期刊: The FEBS Journal
• 作者: Zettler