最新分子生物学的アプローチによる放射線感受性メカニズムの解明

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2022年度は研究計画の通り、前年度樹立したヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）の放射線耐性細胞株の遺伝子発現データの分析を実施した。得られた成果を以下に示す。①放射線耐性細胞株の樹立：放射線感受性の異なる培養細胞株を樹立するために、ヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）に4 GyのX線（1.0 Gy/min, 150 kV, 20 mA, 0.5 mmアルミニウム+0.3 mm銅フィルター）を4週にわたり照射し、増殖してきた生存細胞を放射線耐性細胞株（Res-HL60）とした。対象として放射線照射せずに培養したHL60をWt-HL60とした。現在肺癌細胞株A549についても放射線耐性細胞株の樹立を行っている。②遺伝子発現解析（miRNA）：Wt-HL60とRes-HL60においてどのような遺伝子発現変化が生じているか調べるために、まずmiRNAマイクロアレイ解析を行った。アレイ間の正規化やフィルタリング処理を様々な条件で検討し、スチューデントt検定とFold change解析を行った。分位数正規化と発現量フィルタリングをシグナル値50で処理したところ、発現上昇するmiRNAは5つ、発現低下するmiRNAは6つあった（p<0.05）。現在miRNA強制発現させるプラスミドを構築しており、同定されたmiRNAが放射線耐性へ影響を及ぼすか検討している。③遺伝子発現解析（mRNA）：上記にあわせてmRNAマイクロアレイ解析も行っており、すでにデータを取得している。現在放射線耐性能獲得に関連する新規遺伝子候補の絞り込みを進めている。新規遺伝子の機能解析のために、生存アッセイ、DNA損傷解析、アポトーシス解析などを検討する。A549についても同様の遺伝子発現解析を実施していく。