最新分子生物学的アプローチによる放射線感受性メカニズムの解明

使用最新的分子生物学方法阐明放射敏感性机制

• 批准号: 21H04844
• 负责人: 千葉 満
• 金额: $ 21.88万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-05 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H04844/
• 关键词: 放射線感受性; ゲノム編集; CRISPR/Cas9; 放射線耐性; 放射線抵抗性; マイクロアレイ; HL60; A549; miRNA; ラジオロミクス解析; ラジオロミクス; エクソソーム; バイスタンダー効果; HL-60; mRNA; 遺伝子発現

2022年度は研究計画の通り、前年度樹立したヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）の放射線耐性細胞株の遺伝子発現データの分析を実施した。得られた成果を以下に示す。①放射線耐性細胞株の樹立：放射線感受性の異なる培養細胞株を樹立するために、ヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）に4 GyのX線（1.0 Gy/min, 150 kV, 20 mA, 0.5 mmアルミニウム+0.3 mm銅フィルター）を4週にわたり照射し、増殖してきた生存細胞を放射線耐性細胞株（Res-HL60）とした。対象として放射線照射せずに培養したHL60をWt-HL60とした。現在肺癌細胞株A549についても放射線耐性細胞株の樹立を行っている。②遺伝子発現解析（miRNA）：Wt-HL60とRes-HL60においてどのような遺伝子発現変化が生じているか調べるために、まずmiRNAマイクロアレイ解析を行った。アレイ間の正規化やフィルタリング処理を様々な条件で検討し、スチューデントt検定とFold change解析を行った。分位数正規化と発現量フィルタリングをシグナル値50で処理したところ、発現上昇するmiRNAは5つ、発現低下するmiRNAは6つあった（p<0.05）。現在miRNA強制発現させるプラスミドを構築しており、同定されたmiRNAが放射線耐性へ影響を及ぼすか検討している。③遺伝子発現解析（mRNA）：上記にあわせてmRNAマイクロアレイ解析も行っており、すでにデータを取得している。現在放射線耐性能獲得に関連する新規遺伝子候補の絞り込みを進めている。新規遺伝子の機能解析のために、生存アッセイ、DNA損傷解析、アポトーシス解析などを検討する。A549についても同様の遺伝子発現解析を実施していく。

In 2022, the research project was completed and the analysis of the gene development of the radiation-resistant leukemia cell line (HL60) was carried out in the previous year. The results are shown below.① Establishment of radio-resistant cell lines: The radio-sensitive cultured cell lines were established at the beginning and end of the culture. The osteoblastic leukemia cell line (HL60) was irradiated with 4 Gy of X-ray (1.0 Gy/min, 150 kV, 20 mA, 0.5 mm) for 4 weeks. The survival cells were irradiated with radio-resistant cell line (Res-HL60). HL60 was irradiated with radiation. Lung cancer cell line A549 is now undergoing rapid development in the establishment of radiation-tolerant cell lines. (2) miRNA analysis: Wt-HL60 and Res-HL60 miRNA analysis: Wt-HL60 and Res-HL60 miRNA analysis. The analysis of Fold change is based on the analysis of the condition of Fold change. Quantile normalization of miRNA detection was 50%, miRNA detection was 5%, miRNA detection was 6%(p<0.05). miRNA stress development is now under construction, and the effects of miRNA on radiation tolerance are discussed. (3) mRNA expression analysis: The above records show that mRNA expression analysis is very important. Now radiation tolerance can be associated with the new generation candidate and the new generation candidate. New gene function analysis, survival analysis, DNA damage analysis, failure analysis A549 The analysis of the occurrence of the same kind of transmission is carried out.

项目成果

子ども期の放射線被ばくに特徴的な血清中microRNA 解析

儿童辐射暴露血清microRNA特征分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 千葉満;松本佳菜;門前暁;真里谷靖
• 通讯作者: 真里谷靖

Changes in miRNA expressions in the injured small intestine of mice following high-dose radiation exposure

• DOI: 10.3892/mmr.2020.11054
• 发表时间: 2020-06-01
• 期刊: MOLECULAR MEDICINE REPORTS
• 影响因子: 3.4
• 作者: Chiba, Mitsuru;Uehara, Haruka;Monzen, Satoru
• 通讯作者: Monzen, Satoru

Dose-dependent expression of extracellular microRNAs in colorectal cancer cell line HCT116 exposed to high&#8209;dose&#8209;rate ionising radiation

暴露于高浓度的结直肠癌细胞系 HCT116 中细胞外 microRNA 的表达呈剂量依赖性

• 发表时间: 2022
• 作者: 松本佳菜;千葉満;杉山 彦斗;千葉 満;森野 友貴;山根 一真;菊池 愛;門前 暁;門前 暁;千葉 満;真里谷 靖;千葉 満;松本 佳菜;門前 暁;真里谷 靖;Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm
• 通讯作者: Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm

致死線量被ばくマウスにおける敗血症リスクと腸内細菌叢の生死の検討

检查暴露于致死剂量辐射的小鼠败血症风险和肠道菌群存活率

• 发表时间: 2022
• 作者: 松本佳菜;千葉満;杉山 彦斗;千葉 満;森野 友貴;山根 一真;菊池 愛;門前 暁;門前 暁;千葉 満;真里谷 靖;千葉 満;松本 佳菜;門前 暁;真里谷 靖;Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm;Mitsuru Chiba;Kana Matsumoto;Risa Miura;Satoru Monzen;菅原直央;富岡明日香;辻口貴清;伊藤勝博;千葉満;藤岡美幸;山内可南子
• 通讯作者: 菅原直央;富岡明日香;辻口貴清;伊藤勝博;千葉満;藤岡美幸;山内可南子

Hepatic gene expression and functional changes associated with nonalcoholic steatohepatitis

与非酒精性脂肪性肝炎相关的肝脏基因表达和功能变化

• DOI: 10.3892/mmr.2022.12841
• 发表时间: 2022
• 期刊: Molecular Medicine Reports
• 影响因子: 3.4
• 作者: Matsumoto Kana;Kato Yumiko;Hayashi Momone;Miura Risa;Monzen Satoru;Chiba Mitsuru
• 通讯作者: Chiba Mitsuru