菌類ウイルスが非自然宿主の二次代謝に与える影響の解明

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マイクロインジェクション法を用いて糸状菌への菌類ウイルスの感染が可能であるか検討した。まず、糸状菌の菌糸へのインジェクションを試みた。比較的菌糸が太い種の糸状菌に対してはマイクロピペットを用いて液体を注入することに成功した。しかしながら、これに対して、本研究で扱うアスペルギルス属の糸状菌は、細胞壁が丈夫であること、および、マイクロピペットに対して菌糸が細いことから、マイクロインジェクションをおこなうことが困難であった。そこで、酵素処理によって細胞壁を消化することで、糸状菌のプロトプラストを作製し、プロトプラストにインジェクションすることとした。寒天培地上にプロトプラストを置き、インジェクションを試みたが、寒天培地上をプロトプラストが滑ってしまい、成功しなかった。ホールディングピペットを用いてプロトプラストを固定することで、安定してインジェクションをおこなうことができると期待しており、当該装置の導入を検討している。一方で、プロトプラスト-PEG法を用いた糸状菌へのウイルス感染も試みたが、現在のところ感染には成功していない。今後条件検討を進め、当該手法による感染を目指す。また、糸状菌からウイルスを抽出し、密度勾配遠心によってウイルス粒子を精製する条件を検討した。現在のところ1株の糸状菌から抽出と精製をおこなったのみであるが、今後はウイルスに感染した様々な株からウイルス粒子を単離する予定である。