权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

SHED分泌因子が軟骨細胞の増殖・分化に与える機序を解明する

阐明SHED分泌因子影响软骨细胞增殖和分化的机制

基本信息

批准号：
21J10881
负责人：
村田早羅
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-28 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J10881/
关键词：
細胞外小胞 SHED 軟骨細胞インテグリンβ1 細胞増殖

项目摘要

ヒト乳歯幹細胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth(SHED) ）が放出する細胞外小胞（extracellular vesicles （EVs））をヒト軟骨細胞へ添加後、軟骨細胞の細胞内シグナル伝達の変化とその原因因子の探索を行った。ウェスタンブロッティング解析によりSHEDのEVsの刺激後、軟骨細胞の細胞増殖に関係するERK MAPキナーゼ経路とβ-カテニン経路の活性化を認め、ウェスタンブロッティング解析およびフローサイトメトリー解析により軟骨細胞の増殖に関係する膜表面タンパク質であるインテグリンβ1の発現の上昇を認めた。SHEDのEVsをRNase処理後、軟骨細胞を刺激しても未処理EVsと同様に細胞増殖を促進する結果となったことから、SHEDのEVsの軟骨細胞への影響についてEVs中のタンパク成分に着目した。まず、CRISPRCas9によりSHEDのインテグリンβ1ノックアウト細胞を作製し、ノックアウト細胞由来のEVsで軟骨細胞を刺激したところ、ウェスタンブロッティング解析により軟骨細胞のインテグリンβ1の発現に有意差を認めなかった。次に、SHEDと同様に軟骨細胞のインテグリンβ1ノックアウト細胞を作製した。インテグリンβ1ノックアウト軟骨細胞は未処理の軟骨細胞と比較してBrdU増殖試験により増殖能が低いことがわかった。SHEDのEVsで刺激したところ、BrdU増殖試験およびBrdUセルサイクルアッセイにより、インテグリンβ1ノックアウト軟骨細胞の増殖能は回復を示した。よって、SHEDのEVs中のタンパク成分が軟骨細胞のインテグリンβ1のシグナルを補償または補填することによって、軟骨細胞の増殖能を促進することがわかった。

Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) release extracellular vesicles (EVs)) After the addition of chondrocytes, the factors causing the change in the cells of the chondrocytes are explored.ウェスタンブロッティング Analysis of the relationship between stimulation of SHED and EVs and cell proliferation of chondrocytes ERK MAPキナーゼ経路とβ-カテニン経路のactivationを知め, ウェスタンブロッティングanalytics およびフローサイトメThe analysis of the relationship between the proliferation of cartilage cells and the quality of the surface of the membrane and the recognition of the relationship between the growth and proliferation of cartilage cells. After SHED EVs are treated with RNase, chondrocytes are stimulated and untreated EVs are used to promote cell proliferation and combine. The effect of the fruit and cartilage cells of SHED EVs on the ingredients of the cartilage in EVs is very important.まず、CRISPRCas9 SHEDのインテグリンβ1ノックアウトcellsをproductionし、ノックアウトcells originのEVsでCartilage cell stimulation and analysis of cartilage cellsり Chondrocyte のインテグリンβ1 の発 appear に intentional difference を cognizance めなかった. Second, SHED and the same cartilage cell cartilage cell production system.インテグリンβ1ノックアウトchondrocytes and untreated chondrocytes were compared with the BrdU proliferation test and the proliferation ability was low and the results were low. SHEDのEVsでstimulationしたところ、BrdUproliferation trial験およびBrdUセルサイクルアッセイにより, インテグリンβ1ノックアウトchondrocyte proliferation ability and recovery ability. The ingredients in the EVs and SHED EVs are chondrocytes and cartilage cells. It compensates for the replenishment of cartilage and promotes the growth of cartilage cells.