小腸におけるレナラーゼの生理的意義の解明

阐明小肠肾酶的生理意义

• 批准号: 21J12796
• 负责人: 青木 海
• 金额: $ 1.25万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-28 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J12796/
• 关键词: レナラーゼ; 炎症; 腸管; Caco-2; 細胞保護

ウイルスを用いた過剰発現系で腸管における生体内でのレナラーゼ（RNLS）の機能を検討した。RNLSを過剰発現させるアデノウイルス（RNLS-AdV）を腹腔内投与することでSTAT3のリン酸化率を低下させることが明らかとなった。STAT3は炎症における主要な分子であるため、腸管におけるSTAT3の不活性化は炎症を低下させることに関与すると考えられた。このモデルを用いて、5%DSS投与による腸炎モデルを作成し、抗炎症効果を検証した。その結果、RNLS群では最終的に6割のマウスが生存したのに対し、対照群では3割しか生存しなかった。一方でRNLS-AdVを投与した群では酸化ストレスの指標であるカルボニル化タンパクの発現量が増大していた。in vitroとは異なる結果であったため、その差異がどのようにもたされているのかも含め詳細に検証していく必要がある。細胞モデルではshRNAを用いたノックダウン実験を行なった。shRNAを3種類(#1~#3)準備し、AdVへと搭載し、細胞に感染させたところ、#1で遺伝子発現が顕著に低下したため、このクローンを用いてノックダウン実験を行なった。AdVを感染後、IFN-γとTNF-αで炎症を惹起したところ、sh群で炎症の主要因子であるp65の核内移行が増加していた。興味深いことに、sh群では炎症を惹起せずともp65の核内移行が増加しており、炎症性ケモカインであるIL-8の培地上清濃度が対照群よりも増加していた。しかし、炎症を惹起した群の培地上清IL-8濃度には有意差がなかった。炎症を惹起するTNF-αの濃度や時間が、RNLSの機能を検証するには過剰であった可能性があるため、今後炎症を惹起するTNF-αの濃度や時間を変更していくことでより詳細なRNLSの炎症への関与経路を明らかにしていきたい。

The function of RNLS in the gut is discussed. RNLS-AdV is an intraperitoneal drug that reduces the rate of acidification of STAT3. STAT3 is a major molecule in inflammation. 5% DSS is used to prepare anti-inflammatory effects. As a result, RNLS group is the ultimate 6 cut, 3 cut and 3 cut. On the one hand, RNLS-AdV investment and development indicators increased. In vitro, the results are different, and the differences are different. The cell phone is used for shRNA. shRNA 3 types (#1~#3) Preparation, AdV loading, cell infection,#1 gene development, and application. After AdV infection, IFN-γ and TNF-α induce inflammation, and the intracellular migration of p65, the main factor of inflammation, increases. The concentration of IL-8 in culture supernatant increased due to the increase of intracellular migration of p65 and inflammation. IL-8 concentrations in the supernatant of the culture medium were significantly different from those in the control group. TNF-α concentration and time of inflammation initiation, RNLS function, etc.

项目成果

細胞株を用いた腸管レナラーゼの抗炎症機能の検証

使用细胞系验证肠肾酶的抗炎功能

• 发表时间: 2022
• 作者: 青木 海;菅澤 威仁;竹越 一博
• 通讯作者: 竹越 一博

レナラーゼの高発現が腸管に対して与える影響の検討

肾酶高表达对肠道影响的检测

• 发表时间: 2023
• 作者: 青木 海;酒井 翔太;菅澤 威仁;竹越 一博
• 通讯作者: 竹越 一博

Alteration of gene and protein expression of renalase and its transcription factors in Caco-2 cell

Caco-2细胞肾酶及其转录因子基因和蛋白表达的改变

• 发表时间: 2022
• 期刊: International Journal of Analytical Bio-Science
• 作者: Kai Aoki;Fang Hui;Takehito Sugasawa;Yasuko Yoshida;Yasushi Kawakami;Kazuhiro Takekoshi
• 通讯作者: Kazuhiro Takekoshi

小腸におけるレナラーゼの局在及び酸化 ストレスに対する発現変化

肾酶在小肠中的定位及其响应氧化应激的表达变化

• 发表时间: 2021
• 作者: 青木 海;時野谷 勝幸;菅澤 威仁;鈴木 拓史;吉田 保子;中野 巧朗;竹越 一博
• 通讯作者: 竹越 一博