小腸におけるレナラーゼの生理的意義の解明

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ウイルスを用いた過剰発現系で腸管における生体内でのレナラーゼ（RNLS）の機能を検討した。RNLSを過剰発現させるアデノウイルス（RNLS-AdV）を腹腔内投与することでSTAT3のリン酸化率を低下させることが明らかとなった。STAT3は炎症における主要な分子であるため、腸管におけるSTAT3の不活性化は炎症を低下させることに関与すると考えられた。このモデルを用いて、5%DSS投与による腸炎モデルを作成し、抗炎症効果を検証した。その結果、RNLS群では最終的に6割のマウスが生存したのに対し、対照群では3割しか生存しなかった。一方でRNLS-AdVを投与した群では酸化ストレスの指標であるカルボニル化タンパクの発現量が増大していた。in vitroとは異なる結果であったため、その差異がどのようにもたされているのかも含め詳細に検証していく必要がある。細胞モデルではshRNAを用いたノックダウン実験を行なった。shRNAを3種類(#1~#3)準備し、AdVへと搭載し、細胞に感染させたところ、#1で遺伝子発現が顕著に低下したため、このクローンを用いてノックダウン実験を行なった。AdVを感染後、IFN-γとTNF-αで炎症を惹起したところ、sh群で炎症の主要因子であるp65の核内移行が増加していた。興味深いことに、sh群では炎症を惹起せずともp65の核内移行が増加しており、炎症性ケモカインであるIL-8の培地上清濃度が対照群よりも増加していた。しかし、炎症を惹起した群の培地上清IL-8濃度には有意差がなかった。炎症を惹起するTNF-αの濃度や時間が、RNLSの機能を検証するには過剰であった可能性があるため、今後炎症を惹起するTNF-αの濃度や時間を変更していくことでより詳細なRNLSの炎症への関与経路を明らかにしていきたい。