生体由来の細胞を用いない哺乳類卵母細胞系列の体外培養系の構築

不使用生物来源细胞的哺乳动物卵母细胞谱系体外培养系统的构建

• 批准号: 21J15749
• 负责人: 野阪 善昭
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-28 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J15749/
• 关键词: 卵母細胞; 規定条件下; 多能性幹細胞; 生殖細胞; ES細胞; マウス; 発生; 成長

本年度は引き続き、昨年度に同定した胎生期の卵母細胞の分化、および成体における卵母細胞の成長を規定条件下で再現する培養系により得られた卵母細胞様細胞の特性解析を行った。なお、構築した培養系は非常に再現性が高く、最終的に得られる成長した卵母細胞様細胞の直径の中央値は57~58μmで実験会によらず一定であった。培養34日目に得られた卵母細胞用細胞のトランスクリプトームデータを解析したところ、生後14日目の卵母細胞と同等といえる特徴を有していることが判明した。メチロームを解析したところ、生後7日の卵母細胞と12日目の卵母細胞の中間の特徴を有していた。これはトランスクリプトームデータから推定されるより若干幼若であった。この結果を踏まえ、卵母細胞様細胞の核移植実験を継続して産仔を得ることは難しいと判断した。また、核の拡散固定標本を解析すると、第一減数分裂前期を完了した卵母細胞に特徴的な染色体構造を確認することができた。また種々のヒストン修飾マークを超低インプットCHIP seqを用いて解析したところ、生後14日の卵母細胞と同等であると考えられた。ヒストン修飾とメチル化状態に若干乖離がある理由を現在考察している。以上のデータをまとめ、本年中に査読付き論文として投稿する予定である。また、本研究計画で使用した卵母細胞の成長促進因子探査スクリーニング法は極めて効率よく目的因子を見つけられる実験系であり、さらなる培養系の発展に向けて引き続き利用していく方針である。

This year, the differentiation of oocytes at the embryonic stage, the reproduction of oocytes at the adult stage under specified conditions, and the characterization of oocytes were carried out at the same time last year. The culture system was highly reproducible and the final oocyte diameter was 57~58μm. The oocytes obtained on day 34 of culture were analyzed and characterized on day 14 after birth. The characteristics of oocytes at day 7 and day 12 after birth were analyzed. If you want to know more, please contact us. The result of this process is that oocytes and cells are transferred into the nucleus, and it is difficult to judge whether they are born or not. The chromosome structure of the oocyte is confirmed after the first meiosis is completed. Oocytes on the 14th day of life A number of reasons for the deviation are discussed. The above is a list of papers to be submitted in the middle of the year. In this study, we plan to explore the growth promotion factors of oocytes by using the method of reverse polarization, efficiency and objective factors to see the development of culture lines.

项目成果

A reconstitution of oogenesis under a defined condition from mouse pluripotent stem cells

小鼠多能干细胞在特定条件下重建卵子发生

• 发表时间: 2023
• 作者: Nonaka Hiroshi;Sakamoto Seiji;Shiraiwa Kazuki;Ishikawa Mamoru;Tamura Tomonori;Okuno Kyohei;Kiyonaka Shigeki;Susaki Etsuo A.;Shimizu Chika;Ueda Hiroki R.;Kakegawa Wataru;Arai Itaru;Yuzaki Michisuke;Hamachi Itaru;上岡史人;Yoshiaki Nosaka
• 通讯作者: Yoshiaki Nosaka