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小胞体グルコース転移酵素が有するシャペロン機能の解析

内质网葡萄糖转移酶的伴侣功能分析

基本信息

批准号：
21K05282
负责人：
武田陽一
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Ritsumeikan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

UGGT1はセレノプロテインF（SelenoF）とヘテロ二量体を形成することが知られているが、その複合体形成の詳細は不明であった。UGGT-SelenoF複合体による糖タンパク質のリフォールディングへの寄与を明らかにするため、本年度は、UGGT1に対するSelenoFの結合位置の同定および、複合体内でのSELENOFの可動域を明らかにする研究を行った。プルダウンアッセイによりSelenoFがUGGT1のTRXL2ドメインに結合することを明らかにした。さらに、新たに開発した光親和性架橋剤をSelenoFのシステイン残基に選択的に導入し、UGGT1に対するSelenoFの空間的配向の決定を試みた。その結果、SelenoFは合成架橋剤を介して、UGGT1のTRXL3領域およびβS2とGT24の間のドメインにあるアミノ酸と共有結合を形成していることが確認された。UGGTのSelenoF結合ドメインとその相対的な位置関係を明らかにすることで、SelenoFの機能を予測するための重要な知見が得られたと考えている。一方、UGGTと同様に小胞体糖タンパク質品質管理機構において重要な役割を果たすEDEM2（ER Degradation Enhancing Alpha-Mannosidase Like Protein 2）はUGGTと同じ糖鎖構造を基質とすることが知られている。そこで、UGGTとEDEM2がどのように基質を選別するかを明らかにするため、アグリコン部分に様々な分子を導入した糖鎖基質を合成した。また、合成した、一部の糖鎖基質と昨年度に構築した昆虫細胞発現系で得られた高純度のUGGT1を用い、種々の糖鎖基質に対するUGGT活性評価および、共同研究により開発した新規UGGT阻害剤の活性評価を行った。

The UGGT1 complex is called F (SelenoF). The two-dimensional body forms a complex that is unknown. The UGGT-SelenoF complex is located in the same location as this year's SelenoF, this year's SELENOF, and the SELENOF in vivo. Please tell me that you need to SelenoF the UGGT1 and TRXL2 information in conjunction with your information. The input of the selected SelenoF and the orientation determination of the SelenoF space will be tested by using the optical and sex frames of the new system. The results of the test, the SelenoF synthesis frame, the introduction, the UGGT1 TRXL3 domain, the β S2GT24, and the UGGT1 domain were combined together to form a confirmation test. The UGGT SelenoF is combined with the location of each other. The information is clear, and the SelenoF is able to inform the important information that you are aware of. On the one hand, UGGT has the same information as the management agency of small cell sugar and quality products. It is important to cut the fruit EDEM2 (ER Degradation Enhancing Alpha-Mannosidase Like Protein 2) and UGGT. For example, UGGTEM2, EDEM2, and UGGTTEDEM2, we chose to express some of the molecules involved in the synthesis of glycosyl. In the past year, a series of high-temperature UGGT1 products have been developed for the use of high-temperature UGGT1, and a variety of sugar-based products have been tested for UGGT activity. we will jointly develop new regulations to block the activity of UGGT.