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人工結合タンパク質を基盤とする新しいタンパク質構造安定化戦略の創成

基于人工结合蛋白创建新的蛋白质结构稳定策略

基本信息

批准号：
21K05386
负责人：
田中俊一
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyoto Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

酵素の安定性の改変は、その産業利用において重要な課題である。代表者は最近、人工結合タンパク質の酵素構造表面への結合が、酵素の熱安定性を高く向上させることを発見した。本研究では、①この安定化効果がどれだけの広い酵素で得られるのかという汎用面、そして、②酵素構造表面のどのような部位へ、どのような相互作用様式で結合することが高い安定化に結びつくのかという機序面を明らかにすることを目的に、複数の酵素に対して様々な部位に結合する人工結合タンパク質を創出し、熱力学的・構造学的手法を用いた網羅的かつ体系的な解析を行う。昨年度からより広範のターゲット酵素に対する人工結合タンパク質を取得するため、昨年度とは異なる種類のターゲット酵素に対する人工結合タンパク質の取得を試みた。昨年度と同様に、ファージディスプレイ法や酵母表層ディスプレイ法を用いたスクリーニングを行い、それぞれ結合エピトープの異なる複数の人工結合タンパク質を取得できた。得られた人工結合タンパク質の平衡解離定数（Kd値）はいずれもシングルnMオーダーからサブnMオーダーであることが確認できた。一部のターゲット酵素と人工結合タンパク質の複合体についてはX線結晶構造解析にも成功しており、それらについては相互作用様式も明らかにできている。

Changes in enzyme stability and industrial utilization are important issues. Representative of the recent, artificial binding of the enzyme structure surface, enzyme thermal stability, high temperature, high temperature. In this study, the stability effect of the enzyme was found to be universal, the enzyme structure was found to be universal. Thermodynamics and tectonics are used to analyze the system. In the past year, the number of enzymes in the field of artificial binding has been increased. In the past year, the number of enzymes in the field of artificial binding has been increased. The yeast surface layer was obtained by the same method as the yeast surface layer, and the yeast surface layer was obtained by the same method. The equilibrium dissociation constant (Kd) of the artificial binding substance is determined by the following parameters: A part of the enzyme and artificial combination of the complex of the substance, the X-ray crystal structure analysis, the success of the reaction, the interaction, the interaction.