キク花芽分化の日長応答性を決定するアンチフロリゲン遺伝子の発現調節機構の解明

短日植物であるキクの光周性花成を制御する鍵遺伝子である「アンチフロリゲン」について、日長応答性を担う遺伝子上流の発現調節領域に着目し、その発現機構を明らかにする。長日条件のキクの葉においてアンチフロリゲンの発現が誘導される機構を明らかにすることで新規な学術的知見となり、ひいては実用技術の提案が可能となる。本応募課題ではAFT遺伝子近傍の日長応答配列の同定と、それに作用し発現を制御する転写因子の解明に取り組み、光周性花成の理解を深めることを目的とする。昨年度にAFT遺伝子上流領域の2700塩基のうち、2か所（それぞれ約100塩基）が日長応答に必要であることを明らかにしている（未発表）。R4年度はAFT遺伝子上流領域の欠損部位をずらし、レポーターとしてGUS遺伝子に融合させた組換え体を7コンストラクト、各10系統程度を作出した。レポーターとしたGUS遺伝子の日長応答性をqRT-PCRで解析した。2か所あるそれぞれの応答領域について40塩基程度にまで絞り込み、領域内の転写因子の結合候補部位の探索を行った。それぞれの応答領域を2反復、もしくは3反復で組み込んだ酵母とキクcDNAを用いてワンハイブリッドスクリーニングを実施した。約200万のキクcDNAライブラリから応答領域に結合する可能性のある遺伝子断片を保持する組換えコロニーを50程度取得し、シーケンス解析のためのプラスミド単離を行った。

短日植物であるキクの光周性花成を制御する鍵遺伝子である「アンチフロリゲン」について、日長応答性を担う遺伝子上流の発現調節領域に着目し、その発現機構を明らかにする。長日条件のキクの葉においてアンチフロリゲンの発現が誘導される機構を明らかにすることで新規な学術的知見となり、ひいては実用技術の提案が可能となる。本応募課題ではAFT遺伝子近傍の日長応答配列の同定と、それに作用し発現を制御する転写因子の解明に取り組み、光周性花成の理解を深めることを目的とする。昨年度にAFT遺伝子上流領域の2700塩基のうち、2か所（それぞれ約100塩基）が日長応答に必要であることを明らかにしている（未発表）。R4年度はAFT遺伝子上流領域の欠損部位をずらし、レポーターとしてGUS遺伝子に融合させた組換え体を7コンストラクト、各10系統程度を作出した。レポーターとしたGUS遺伝子の日長応答性をqRT-PCRで解析した。2か所あるそれぞれの応答領域について40塩基程度にまで絞り込み、領域内の転写因子の結合候補部位の探索を行った。それぞれの応答領域を2反復、もしくは3反復で組み込んだ酵母とキクcDNAを用いてワンハイブリッドスクリーニングを実施した。約200万のキクcDNAライブラリから応答領域に結合する可能性のある遺伝子断片を保持する組換えコロニーを50程度取得し、シーケンス解析のためのプラスミド単離を行った。