Analysis of female-specific blood feeding mechanisms in hematophagous insects

食血昆虫雌性特异性吸血机制分析

• 批准号: 21K05622
• 负责人: 山本 大介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05622/
• 关键词: 吸血昆虫; 性分化; ハマダラカ; サシチョウバエ; 害虫防除

前年度の次世代シークエンス（NGS）解析により明らかになった「ハマダラカDSXM-KO雄において吸血に関連する唾液遺伝子の発現量が野生型（WT）雄より高いことに」ついてqPCR法による発現定量解析を行い、DSXM-KO雄、野生型雄および野生型雌間での比較を行った。唾液遺伝子のうち機能や構造などの解析報告がある8種について調べた。NGS解析で発現量増加が見られた遺伝子（aapp、apy、TRIO、salivary peroxidase、D7r1、D7L2、anophelin）については、qPCRでも同様の結果を示し、そのほとんどがWT雄より100-1,000倍量も増加していた。さらにDSXM-KO雄におけるこれら遺伝子の発現量はWT雄だけでなく、WT雌よりも多いことが明らかとなった。また、唾液腺抽出物のSDS-PAGE解析からこれらの遺伝子がRNAだけでなくタンパク質レベルでも増加している事が明らかとなった。DSXM-KO雄のNGSデータをさらに解析し、DSXM-KO雄で発現減少している遺伝子にはクチクラ関連の遺伝子が多い事が分かった。これらの中には雄特異的な発現が報告されている分子も含まれていた。サシチョウバエ（Phlebotomus papatasi）について、各発生段階におけるdsxの発現を調べ、発現量は終齢幼虫から増加し始め蛹期が最も高い事を明らかにした。サシチョウバエにおけるdsxの機能解析のためにdsRNAを作製し、終齢幼虫へのインジェクションによるRNAiを検討した。qPCRによるdsRNA注射個体での発現量解析からある程度の発現抑制効果が見られた。ハマダラカにてDSXFまたはDSXMを組織特異的に発現する遺伝子組換え蚊作製用のベクターコンストラクトを構築した。

The quantitative analysis of saliva gene expression in DSXM-KO male and wild-type female was carried out by qPCR method. There are 8 kinds of analysis reports on the function and structure of saliva heritage. NGS analysis increased the amount of detection of genes (aapp, apy, TRIO, salivary peroxidase, D7r1, D7L2, anophelin), and qPCR showed the same results. The amount of detection increased by 100-1,000 times compared with WT. The amount of time spent in the production of DSXM-KO male is different from that of WT male, WT female and so on. SDS-PAGE analysis of salivary gland extracts from different tissues DSXM-KO male NGS data analysis, DSXM-KO male occurrence reduction, transmission, transmission This is the first time in a long time that I've seen this. Phlebotomus papatasi (Phlebotomus papatasi) is the most important stage in the development stage. The function of dsx is analyzed and the RNAi is discussed. qPCR analysis of the expression of dsRNA in injected individuals shows that the expression of dsRNA is inhibited. DSXF is an organization-specific component of DSXM.

项目成果

ハマダラカにおけるアミノペプチダーゼN様遺伝子のノックアウト解析

按蚊氨肽酶N样基因的敲除分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 岡西政典・三井翔太・CHEN Chong・川端美千代・小森いづみ・幸塚久典;大津樹・後藤寛貴;土原和子;岡西政典・三井翔太・川端美千代・小森いづみ・幸塚久典;山本大介・水島大貴・加藤大智
• 通讯作者: 山本大介・水島大貴・加藤大智

蚊は弾性タンパク質レジリンと進化的に関連する特徴的なクチクラタンパク質をもつ

蚊子有一种独特的角质层蛋白，该蛋白在进化上与弹性蛋白节肢弹性蛋白相关

• 发表时间: 2023
• 作者: 大久保さくら・山本大介・Judith H Willis;外川徹
• 通讯作者: 外川徹

精子ができないマラリア媒介蚊の作出 : 遺伝子操作による蚊の生殖制御技術

创造不能产生精子的传播疟疾的蚊子：通过基因操纵的蚊子繁殖控制技术

• 发表时间: 2022
• 期刊: 昆虫DNA研究会ニュースレター
• 作者: Tabata Jun;Yasui Hiroe;山本大介
• 通讯作者: 山本大介

ハマダラカから見出されたレジリン様タンパク質の構造と発現の解析

按蚊类节肢动物蛋白的结构和表达分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 大久保さくら・山本大介・Judith H Willis;外川徹
• 通讯作者: 外川徹

Ayaconin, a novel inhibitor of the plasma contact system from the sand fly Lutzomyia ayacuchensis, a vector of Andean-type cutaneous leishmaniasis

Ayaconin，一种来自沙蝇 Lutzomyia ayacuchensis 的血浆接触系统的新型抑制剂，沙蝇是安第斯型皮肤利什曼病的载体

• DOI: 10.1016/j.actatropica.2022.106602
• 发表时间: 2022
• 期刊: Acta Tropica
• 影响因子: 2.7
• 作者: Kawahori Satoru;Seki Chisato;Mizushima Daiki;Tabbabi Ahmed;Yamamoto Daisuke S.;Kato Hirotomo
• 通讯作者: Kato Hirotomo