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新たなサイレージ調製技術の確立に向けた特異的オリゴ糖代謝機構の解明

阐明特定寡糖代谢机制以建立新的青贮饲料制备技术

基本信息

批准号：
21K05898
负责人：
西本完
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05898/
关键词：
Loliose サイレージサイレージ発酵オリゴ糖

项目摘要

前年度に実施したロリオースのみを炭素源とする培地での培養試験において、ロリオースに対する利用性が確認できた6種のClostridiales目微生物うち、基準株の全ゲノム情報が解析・公開されている1菌株について、ロリオース加水分解酵素の同定を試みた。当該微生物ゲノムDNA上に存在するロリオースを加水分解すると予想される酵素の遺伝子ホモログ候補を相同性検索により探索した結果、５種の候補遺伝子が見出された。これらの遺伝子のDNA配列をそれぞれ合成し、異種宿主発現により大腸菌に生産させることで5種のリコンビナント酵素を調製した。これらの酵素は遺伝子合成の際に付与したヒスチジンタグ配列を利用してニッケル-NTAスピンカラムに供することで簡易精製を行った。部分精製したリコンビナント酵素を用いて加水分解活性を確認した結果、２種のリコンビナント酵素において活性が検出された。この2種の酵素は同じ糖質加水分解酵素ファミリーに属していることから、今後詳細な特性解析を行うことで、ロリオース資化性との関連性を明らかにしていく。また、ロリオースを資化し、サイレージ発酵に関わる微生物を探索するため、ロリオースのみを炭素源とした培地による集積培養により、イタリアンライグラスおよびイタリアンライグラスサイレージからそれぞれ１２株および１４株の芽胞形成細菌を分離することに成功した。計26株の分離は想定以上の成果であり、これらの微生物を同定することでロリオースがサイレージ発酵に及ぼす影響について想定できるようになる。

In the previous year, the carbon source was tested, the soil was cultivated, the microorganisms of Clostridiales order were confirmed, and the standard strains were analyzed in the same way as that of water-decomposing enzymes. When the microbe is on the DNA, it is expected that the enzyme will be used to decompose the enzyme, the enzyme will be the same, and the homology will be detected. The mutant DNA is equipped with a variety of synthetic enzymes, and several hosts are used to detect the production of five kinds of enzyme enzymes from different hosts. The enzyme is used to synthesize the enzyme, and the enzyme is used to synthesize the enzyme. The enzyme is used in the synthesis of the enzyme. Some of the purified enzymes were purified by adding water to confirm the results of the results, and the activities of two kinds of enzyme were detected. The two enzymes are the same as sugar-added water-decomposing enzymes. The two enzymes are in the same category as sugar-added water-decomposing enzymes. In the future, the characteristics of the enzyme will be analyzed, and the relationship between the two enzymes will be analyzed. The bacteria were isolated successfully from 12 strains of spores, 14 strains of spores, 12 strains of spores and 14 strains of spores. A total of 26 isolates were identified as the results of the above results, microbes and microorganisms were identified in the same way.