Identification of liquid biopsy-based prognostic factors for endemic bovine leukemia

基于液体活检的地方性牛白血病预后因素的鉴定

• 批准号: 21K05915
• 负责人: 山田 慎二
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05915/
• 关键词: 牛伝染性リンパ腫; リンパ腫発症診断; リキッドバイオプシー; miRNA; 地方病性牛白血病; microRNA

牛伝染性リンパ腫ウイルス（BLV）のゲノム上には低分子RNA（micro RNA: miRNA）がコードされており、BLV感染牛のB細胞ではmiRNAが持続的に転写されていることが明らかにされている。BLV由来miRNA（blv-miRNA）およびウシ由来miRNA（bta-miRNA）のリンパ腫（EBL）発症への関与については不明であり、病態進行とmiRNA発現の関連性を解析することは牛伝染性リンパ腫を理解する上で重要と考えられる。本研究ではblv-miRNAおよびbta-miRNAに着目し、血清中の低分子miRNAがEBL発症を予測可能なバイオマーカーとなりうるかを検証する。昨年度までの研究では、BLV非感染牛と比較してBLV感染牛（AL牛）のB細胞で有意に発現上昇している特定のmiRNA（bta-miR-X）を見出した。さらに、BLV非感染牛、BLV感染未発症牛（AL牛）および発症牛（EBL牛）の血清から低分子RNAを抽出し、定量RT-PCRによってbta-miR-Xの発現量を測定したところ、EBL牛ではBLV非感染牛およびAL牛と比較してbta-miR-Xの発現量が有意に高かった。野外のBLV感染牛由来血液はほとんどが定点サンプルであり、感染初期～無症状期～リンパ腫発症期まで同一個体のサンプルを経時的に採材することは困難である。そこで、ヒツジ感染モデルを用い、BLV感染によって変動する血中miRNAを経時的に追跡している。BLV感染牛由来PBMCで攻撃したヒツジ（n=5）においてウイルス感染を確認しており、攻撃から1か月ごとにヒツジ血清とPBMCを分離・保存し、プロウイルス量のモニタリングを継続している。

Cattle 伝 dyeing リ ン パ swollen ウ イ ル ス (BLV) の ゲ ノ ム on に は low molecular RNA (micro RNA: the miRNA) が コ ー ド さ れ て お り, BLV infection の B cells で は micrornas が hold 続 に planning write さ れ て い る こ と が Ming ら か に さ れ て い る. BLV origin of micrornas (BLV - micrornas) お よ び ウ シ origin of micrornas (bta - micrornas) の リ ン パ swollen (EBL) 発 disease へ の masato and に つ い て は unknown で あ り, pathological と micrornas 発 is の masato even sex を parsing す る こ と は cattle 伝 dyeing リ ン パ swollen を understand す る で important と exam え ら れ る. This study で は BLV - micrornas お よ び bta - micrornas に mesh し, serum の low molecular micrornas が EBL 発 disease を to measure may な バ イ オ マ ー カ ー と な り う る か を 検 card す る. Yesterday annual ま で の research で は, BLV bovine と compare し て BLV bovine (cow) の B cells で intentionally に 発 now rising し て い る specific の micrornas (bta - miR - X) を shows し た. さ ら に, BLV the bovine, BLV infection not 発 cattle (AL cows) お よ び 発 disease of cattle (EBL) の serum か ら を low molecular RNA extraction し, quantitative rt-pcr に よ っ て bta - miR - X の を 発 now quantity determination し た と こ ろ, EBL で は BLV the bovine お よ び AL cattle と compare し て bta - miR - The occurrence volume of X is が intentionally に high った. Wild の BLV bovine origin blood は ほ と ん ど が fixed-point サ ン プ ル で あ り, ~ early asymptomatic infection period ~ リ ン パ swollen 発 disease period ま で same individual の サ ン プ ル を 経 に mining material when す る こ と は difficult で あ る. そ こ で, ヒ ツ ジ infection モ デ ル を い, BLV infection に よ っ て - move す る blood micrornas を 経 に when tracing し て い る. BLV bovine origin PBMC で tapping shock し た ヒ ツ ジ (n = 5) に お い て ウ イ ル ス infection を confirm し て お り, shock attack か ら か 1 month ご と に ヒ ツ ジ serum と PBMC を separation, save し, プ ロ ウ イ ル ス quantity の モ ニ タ リ ン グ を 継 続 し て い る.