分離困難ウイルスの分離に向けたスパイクアダプター法の開発

开发用于分离难以分离病毒的刺突适配器方法

• 批准号: 21K05948
• 负责人: 吉永 圭介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Technology, Kumamoto College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05948/
• 关键词: セルパンニング; インターナライズ; パラトープ解析; VeroE6; 発現レベルの向上; セレクション法の改良; 凸面ライブラリの構築; FIPV結合性クローン; ウイルス分離; 分離困難ウイルス; スパイクアダプター法; FIPV; Vero細胞

令和４年度は、令和３年度に発現向上を目指してN末端領域をフォールディングしやすい配列に改良した凸面ライブラリと、研究分担者によって調製されたFIPVを用いて、FIPV結合クローンのセレクションを３ラウンドおこなった。セレクション時は、使用するブロッキング剤、結合クローンの溶出法の改良をおこなった。その結果FIPV結合クローンが8種類得られ、ELISAによるFIPV結合活性、クローンの塩基配列解読をおこなった。クローンの抗原結合部位（パラトープ）のアミノ酸配列の解析からパラトープの配列の特徴がわかった。凹面ライブラリについても、インバースPCRを応用した方法でライブラリ構築を完了させ、ライブラリの評価をおこなった。セレクションに使用する培養細胞（VeroE6）の系を立ち上げた。VeroE6に結合およびインターナライズするクローンのセレクションを２ラウンドおこなったところ、実際にVeroE6細胞内からファージを回収することができた。現在、クローンのパラトープ解析のために必要な塩基配列解析をおこなっている。さらに各クローンについてVeroE6細胞へのインターナライズ活性の定量的評価をおこなっている。

In 2004, the development of FIPV was improved, and the FIPV was combined with the N-terminal field. The improved dissolution method for the preparation and use of the solution is described in detail below. The results showed that 8 kinds of FIPV binding proteins were obtained, and the FIPV binding activity was detected by ELISA. Analysis and characterization of acid alignment of antigen-binding site of CRU Concave color, color, PCR, method, color, construction, color, evaluation The culture cell line (VeroE6) used in the study was established. VeroE6 is a combination of two different types of cells. In fact, VeroE6 cells contain different types of cells. Now, it is necessary to analyze the basic arrangement. VeroE6 cells were evaluated quantitatively for their activity.

项目成果

Construction of LRR-Ab library based on Leucine-rich repeats by module engineering.

通过模块工程构建基于富含亮氨酸重复序列的LRR-Ab文库。

• 发表时间: 2021
• 作者: Haruka Sezaki;Keisuke Yoshinaga.
• 通讯作者: Keisuke Yoshinaga.