Study of non-invasive artificial insemination method by artificial cell membrane fusion in sperm and oocyte.

精子与卵母细胞人工细胞膜融合无创人工授精方法的研究

基本信息

  • 批准号:
    21K06005
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

実験動物を対象とした顕微授精は、凍結精子からの個体復元や、繁殖困難な系統の経代に用いるが、汎用されているICSIでは作製した受精卵からの胎子発生率は低い。その原因は、卵子へのピペット挿入による物理的損傷や、精子と共に注入する培地の化学的な毒性が考えられる。そのためピペット挿入を行わない、卵子と精子の細胞膜融合を人工的に促進して授精させる方法を開発する。本年度は、精子と卵子の細胞膜を高電圧で融合して授精させる研究を主軸とした。アクロソームキャップ除去の為に化学的なLysolecithin、非イオン系界面活性剤のTriton X-100、アルカリ溶液での処理および超音波で物理的に取り除く方法を検討した。その結果、Triton X-100とアルカリ溶液での除去はある程度除去が出来たが、Lysolecithinおよび超音波では不完全だったので、更なる条件検討をおこなう。卵子の膜融合の基礎的条件設定を探るために、電圧の印可を行う条件設定を検討した。透明帯を除去した卵子の表面に精子を圧着させ、2つの通電プローブの間に卵子と精子を挟み込み電圧を印加する。そして電圧、パルス、印可間隔などの設定の検討を開始した。本研究では、一度に複数の卵子を体外に取り出して長時間の顕微操作をおこなうが、時間経過と共に体外に取り出した卵子は劣化し、操作の開始と終了際の卵子の状態が異なる可能性がある。均一な実験試料の確保のため、採取した卵子を凍結保存する方法を検討した。検討の結果、凍結卵子を体外受精しても顕微受精しても、新鮮卵子と同様の受精率と発生率を得る方法ができた。この凍結卵子を適時融解して用いると共に、論文報告の準備を開始した。
In animals, micro-insemination, frozen sperm, individual recovery, reproductive difficulties, systematic reproduction, and widespread use of ICSI are the main factors affecting fertility. The causes include physical damage to the egg and chemical toxicity of sperm injection. The method of artificial insemination was developed by means of cell membrane fusion of egg and sperm. This year, sperm and egg cell membrane high voltage fusion, insemination, the main axis Chemical Lysolecithin, non-ionic interfacial active agent Triton X-100, ultrasonic solution treatment and physical removal methods are discussed. Results, Triton X-100, Lysolecithin, Ultrasonic, Incomplete, Change Conditions The basic conditions for egg membrane fusion are discussed. The conditions for voltage printing are discussed. The transparent band removes the sperm from the surface of the egg, and the electric field between the egg and the sperm. Start the discussion on setting the voltage, range and print interval. In this study, it is possible that multiple oocytes may be extracted from vitro for a long period of time, and the oocytes may deteriorate at the beginning and end of the operation. Methods for uniform sample preparation and egg freezing are discussed. The results of the study, frozen eggs, in vitro fertilization, microfertilization, fresh eggs, and fertilization rate and fertility rate were obtained. The frozen eggs were thawed in time, and the preparation of the paper began.

项目成果

期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
全自動マイクロマニピュレーターを用いたマウスの遺伝子改変.
使用全自动显微操作器对小鼠进行基因改造。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    江藤智生,植田裕基;伊藤亮治;高橋司;渡部聡朗;後藤元人;外丸祐介;田中伸明;高橋利一.
  • 通讯作者:
    高橋利一.
生殖細胞に施すマイクロマニピュレーションの電動化・自動化
生殖细胞显微操作的机动化和自动化
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    牛 小蛍;竹平 佳菜子;加藤 敦之;伊藤 秀臣;江藤智生
  • 通讯作者:
    江藤智生
最小容量ガラス化法と急速融解によるラット1細胞期胚ガラス化保存法の高度化.
使用最小体积玻璃化和快速解冻促进大鼠单细胞阶段胚胎的玻璃化保存。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    関信輔;川辺敏晃;及川剛宗;山﨑渉;福田康義;小畑孝弘;東谷美沙子;矢野愛美;江藤智生.
  • 通讯作者:
    江藤智生.
全自動マイクロインジェクションによる遺伝子改変マウスの作製.
通过全自动显微注射创建转基因小鼠。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    江藤智生;植田裕基;伊藤亮治;高橋司;渡部聡朗;後藤元人;外丸祐介; 高橋利一;田中伸明
  • 通讯作者:
    田中伸明
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  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
    佐々木えりか
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  • 作者:
    高橋 司;佐藤 人美;江藤 智生;橋本 晴夫;梅山 一大;長嶋 比呂志;佐々木 えりか
  • 通讯作者:
    佐々木 えりか
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  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐藤 人美;高橋 司;江藤 智生;梅山 一大;長嶋 比呂志;佐々木 えりか
  • 通讯作者:
    佐々木 えりか
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    遠藤 整;志田 侑華里;大和田 賢;稲垣 豊;住吉 秀明;紙谷 聡英;江藤 智生;立道 昌幸
  • 通讯作者:
    立道 昌幸

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    $ 2.58万
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