B細胞共受容体の自己抗原認識機構と自己免疫疾患抑制の構造相関

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本研究では、B細胞抑制性共受容体CD72と自己抗原Sm/RNPとの複合体の立体構造を決定し、その構造情報に基づき特異的な分子認識機構を解明する。研究二年目の2022年度は、以下の通り研究を実施した。1. ヒト由来CD72リガンド結合ドメインの構造解析前年度の成果により、これまで試料調製が難しかったヒト由来CD72リガンド結合ドメインが安定的に調整できるようになった。結晶化実験の結果、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインに特徴的な長い挿入ループ部位を短絡した発現コンストラクトについて、結晶構造解析に成功した。得られた構造から、ヒト由来CD72においては、推定されるリガンド結合部位の分子表面電荷分布は、マウス由来CD72のそれとは大きく異なることが明らかとなった。これにより、CD72のリガンド認識機構における分子間の相補的な電荷分布による寄与以外の認識機構の存在が確実に存在することが示された。2. ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体試料の調製ヒト由来CD72リガンド結合ドメインの試料調製については、長い挿入ループ部位を保持した試料も調製法を確立した。これについても結晶構造解析を進めると同時に、Sm/RNPとの複合体試料の調製法を検討した。これに伴い、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPなどのリガンド分子との相互作用解析を、表面プラズモン共鳴法（SPR）やELISA法などで行った。これまでのマウス由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体構造解析に加え、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体構造解析も行える見通しとなり、試料調製を進めている。