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Functional characterization of Myc-depedent ribosomes by Ribo Mega-SEC coupled to mass spectrometry-based proteomics

Ribo Mega-SEC 与基于质谱的蛋白质组学结合对 Myc 依赖性核糖体的功能表征

基本信息

批准号：
21K06138
负责人：
吉川治孝
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

リボソームは生物に必須の細胞内翻訳装置である。がん細胞はリボソーム合成を活性化させてリボソーム量を増やし、その成長と増殖に必要なタンパク質量を確保する。転写因子Mycはリボソームの全構成成分の遺伝子転写と、リボソーム自体の合成に必要なタンパク質群の遺伝子転写を促進することで、リボソーム量の増加に寄与する。本研究では、Mycによるリボソームの質的変化とそれに起因する翻訳能の変化も細胞がん化に関わるのではないか？という仮説のもと、Myc依存的なリボソームとの相互作用タンパク質の変化を系統的に解析することを目的としている。昨年度は最新のuHPLC装置を用いてさらなる最適化を行なうことで、従来よりも高感度・高再現的なリボソームの分離法を確立している。そこで本年度は本手法を用いて、Myc発現依存的なリボソーム構成成分の変化をより高深度で解析することを試みた。薬剤添加によりMycを発現する神経芽腫細胞株に対して薬剤処理・未処理を行ない、細胞を可溶化後にRibo Mega-SECにより分離することで翻訳が活発なポリソーム画分を得た。その画分に含まれるタンパク質を精製後、トリプシンによる消化によりペプチドを生成し、LC-MS/MS解析を行なった。その結果、2800以上のタンパク質の同定と定量に成功し、Myc発現依存的に変動するリボソーム相互作用因子群を特定した。

The cellular inversion device is essential for the development of biological systems. To ensure the quality of cells, the amount of cells that are activated and the quality of cells that are necessary for growth and reproduction are increased. The expression factor Myc promotes the expression of all components of the complex, and the expression factor Myc promotes the expression of all components of the complex. In this study, Myc was used to investigate the causes of the qualitative changes in myc and myc. The analysis of the system is based on the analysis of the nature of the system. Last year, the latest uHPLC equipment was used to optimize the separation method for high sensitivity and high reproducibility. This year, the method is used to analyze the composition of the system. Myc was added to the cell line, and the cell line was treated and untreated. Ribo-Mega-SEC was isolated and the cell line was transformed into a viable cell line. After purification, digestion, generation and LC-MS/MS analysis, the quality of the product is determined. The results are as follows: 2800 or more samples are qualitatively and quantitatively successful, Myc appears to be dependent on a variety of interaction factors.