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小胞体サブドメインで起こるオートファゴソームサイズ調節機構の理解

了解内质网亚域中发生的自噬体大小调节机制

基本信息

批准号：
21K06151
负责人：
山本洋平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は細胞に生じた分解基質がオートファゴソームによって隔離分解するために重要と考えられる小胞体のサブドメインに局在することが明らかになったERdj8をターゲットにして、その詳細なメカニズムを明らかにすることを目的として研究を遂行した。研究実施計画に記載したように、ERdj8とリン脂質合成酵素およびATGタンパク質の関係を明らかにすること、ERdj8の小胞体内腔機能ドメインの働きを明らかにすること、そしてERdj8の超近傍で働くタンパク質の同定を行うことを計画した。まず、一つ目の研究計画についてだが、ERdj8とリン脂質合成酵素であるCEPT1が一部共局在することから、それらが結合しているかについて明らかにするため共沈降実験を行なった。その結果、強くはないがERdj8とCEPT1の結合が観察された。この結果をもとにERdj8が小胞体で合成されるホスファチジルコリン（PC）に対して影響を及ぼすかどうか調べるために、ERdj8を欠損した培養細胞（ERdj8KO細胞）を用いて、研究実施計画通りPCのラベリング実験を行なった。その結果、ERdj8KO細胞ではPCの合成が著しく減少していることが強く示唆された。また、その結果を踏まえ、ERdj8-GFPノックイン細胞の樹立を行なった。最終年度に実施した研究成果および補助事業期間全体を通じて実施した研究成果は、小胞体サブドメインにおいて、ERdj8がPCの合成をCEPT1と共に制御することを強く示唆するものであった。このことは、その制御メカニズムを明らかにする上で重要な意義を持つものであるといえる。

This study was carried out on the basis of the results of cell division and matrix analysis, including the results of cell division and matrix analysis. The study implementation plan documents the relationship between ERdj8 and ATG in the microsomal lumen function and the stability of ERdj8 in the near future. A research project is planned to be carried out in the field of lipid synthesis, such as ERdj8 and CEPT1. The result is that ERdj8 and CEPT1 are combined. The results showed that ERdj8 cells were synthesized in vitro, and ERdj8 cells were cultured in vitro (ERdj8 KO cells). As a result, ERdj8KO cells are able to synthesize PC and reduce its activity. ERdj8-GFP cells were established. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all parties. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all parties. The research results of the final year and the grant business period are communicated to all parties. The importance of this is that we should not lose sight of it.