陸上植物に保存された葉緑体ペプチドグリカン関連タンパク質SLHの解析

陆生植物叶绿体肽聚糖相关蛋白SLH的分析

基本信息

批准号：
21K06251
负责人：
武智克彰
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒメツリガネゴケ葉緑体包膜間には，壁成分としてペプチドグリカン（PG）が含まれる。PGと相互作用するタンパク質を明らかにするため，細菌においてPG結合能が知られるSLHドメインを持つタンパク質がヒメツリガネゴケに存在しないかデータベース検索を行ったところ，4種類の相同遺伝子を見いだし，PpSLH1,2,3,4と命名した。4種類のPpSLH遺伝子の4重遺伝子破壊ラインを作出したところ，葉緑体内に巨大な小胞様構造が観察された。sGFPを用いて4種類のPpSLHsの局在を調べたところ葉緑体周辺部にドット状に局在することが示されたことから，葉緑体包膜間に存在するPGとの関連が示唆された。本年度はPpSLHs機能を明らかにするため，PpSLHsのマルチドメイン構造の解析を行った。PpSLHsはN末端から順に，推定葉緑体移行配列，天然変性領域，1つの膜貫通ドメイン，ペプチドグリカン（PG）結合能が知られるSLHドメイン，タンパク質間相互作用に関わるcoiled-coil構造，機能未知のC末領域をもつことが推測された。各種ドメインを欠損させたsGFPとの融合タンパク質をヒメツリガネゴケ細胞で発現させることで，局在変化を調べ，正常なドット状局在に重要な領域を絞りこんだ。またPpSLHがPGと結合できるか明らかにするために，in vitro結合アッセイを試みた。さらに4重遺伝子破壊ラインで検出される葉緑体内巨大小胞膜が，葉緑体のどの膜由来であるのかを確かめるため，既知の葉緑体膜結合タンパク質をマーカーとし，小胞膜の由来を調査した。

肽聚糖（PG）包含在豹豹的叶绿体包膜之间的壁成分。为了澄清与PG相互作用的蛋白质，我们搜索了数据库，以查看是否有SLH结构域的蛋白质（已知细菌中具有PG结合能力），以确定细菌中是否存在具有SLH结构蛋白的蛋白质，该蛋白在细菌中是否已知，该蛋白质是被已知的PG，并发现了四种类型的同源基因和命名为PPS pps ppslh1，ppslh1，2，4。在叶绿体中观察到囊泡状结构。使用SGFP研究了四种类型的PPSLHS的定位，并表明它们以类似点样的方式定位于叶绿体的外围，这表明与叶绿体信封之间存在的PGS存在关系。今年，为了阐明PPSLHS功能，我们分析了PPSLHS的多域结构。据推测，PPSLHS从N末端开始，一种推定的叶绿体转移序列，一个自然变性的区域，一个自然变性的区域，一个单个跨膜结构域，一个已知具有肽聚糖（PG）结合能力的SLH结构域，一种涉及蛋白质 - 蛋白质相互作用涉及蛋白质 - 蛋白质 - 蛋白质相互作用的固结结构，涉及蛋白质 - 蛋白质 - 蛋白质相互作用和未知的C-终端终端区域。通过与SGFP表达融合蛋白，该融合蛋白在SGFP的细胞中已经缺乏各种域，我们研究了定位的变化，并缩小了对于正常点样定位而言重要的区域。还试图确定PPSLH是否可以与PG结合，并尝试了体外结合测定。此外，为了确定在四倍体基因破坏线中检测到的叶绿体巨型囊泡膜的哪些膜，我们使用已知的叶绿体膜结合蛋白作为标志物来研究囊泡膜的起源。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

機能阻害で葉緑体内に小胞様構造が出現するPpSLHの局在を決めているドメインの解析

分析决定 PpSLH 定位的结构域，由于功能抑制，叶绿体中出现囊泡样结构

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
緒方玲香;武智克彰;高野博嘉
通讯作者：
高野博嘉

ヒメツリガネゴケのマルチドメインタンパク質PpSLHの各ドメインを用いた葉緑体内局在解析

使用苔藓立碗藓多结构域蛋白 PpSLH 的每个结构域进行叶绿体内定位分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
緒方玲香;武智克彰;高野博嘉
通讯作者：
高野博嘉

ヒメツリガネゴケの葉緑体形態に関与する糖結合性SLHドメイン含有タンパク質の機能解析

拟南芥叶绿体形态中含糖结合 SLH 结构域蛋白的功能分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
緒方玲香;武智克彰;高野博嘉
通讯作者：
高野博嘉

(3) コケとシロイヌナズナが持つSLHドメイン含有葉緑体タンパク質の葉緑体内局在と機能解析

(3) 苔藓和拟南芥含SLH结构域叶绿体蛋白的叶绿体内定位及功能分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
緒方玲香;宮﨑千里;武智克彰;高野博嘉
通讯作者：
高野博嘉

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通讯作者：
Matsuda N. Sakamoto N. Tachibana S. Yurimoto H.