陸上植物に保存された葉緑体ペプチドグリカン関連タンパク質SLHの解析

ヒメツリガネゴケ葉緑体包膜間には，壁成分としてペプチドグリカン（PG）が含まれる。PGと相互作用するタンパク質を明らかにするため，細菌においてPG結合能が知られるSLHドメインを持つタンパク質がヒメツリガネゴケに存在しないかデータベース検索を行ったところ，4種類の相同遺伝子を見いだし，PpSLH1,2,3,4と命名した。4種類のPpSLH遺伝子の4重遺伝子破壊ラインを作出したところ，葉緑体内に巨大な小胞様構造が観察された。sGFPを用いて4種類のPpSLHsの局在を調べたところ葉緑体周辺部にドット状に局在することが示されたことから，葉緑体包膜間に存在するPGとの関連が示唆された。本年度はPpSLHs機能を明らかにするため，PpSLHsのマルチドメイン構造の解析を行った。PpSLHsはN末端から順に，推定葉緑体移行配列，天然変性領域，1つの膜貫通ドメイン，ペプチドグリカン（PG）結合能が知られるSLHドメイン，タンパク質間相互作用に関わるcoiled-coil構造，機能未知のC末領域をもつことが推測された。各種ドメインを欠損させたsGFPとの融合タンパク質をヒメツリガネゴケ細胞で発現させることで，局在変化を調べ，正常なドット状局在に重要な領域を絞りこんだ。またPpSLHがPGと結合できるか明らかにするために，in vitro結合アッセイを試みた。さらに4重遺伝子破壊ラインで検出される葉緑体内巨大小胞膜が，葉緑体のどの膜由来であるのかを確かめるため，既知の葉緑体膜結合タンパク質をマーカーとし，小胞膜の由来を調査した。

ヒメツリガネゴケ葉緑体包膜間には，壁成分としてペプチドグリカン（PG）が含まれる。PGと相互作用するタンパク質を明らかにするため，細菌においてPG結合能が知られるSLHドメインを持つタンパク質がヒメツリガネゴケに存在しないかデータベース検索を行ったところ，4種類の相同遺伝子を見いだし，PpSLH1,2,3,4と命名した。4種類のPpSLH遺伝子の4重遺伝子破壊ラインを作出したところ，葉緑体内に巨大な小胞様構造が観察された。sGFPを用いて4種類のPpSLHsの局在を調べたところ葉緑体周辺部にドット状に局在することが示されたことから，葉緑体包膜間に存在するPGとの関連が示唆された。本年度はPpSLHs機能を明らかにするため，PpSLHsのマルチドメイン構造の解析を行った。PpSLHsはN末端から順に，推定葉緑体移行配列，天然変性領域，1つの膜貫通ドメイン，ペプチドグリカン（PG）結合能が知られるSLHドメイン，タンパク質間相互作用に関わるcoiled-coil構造，機能未知のC末領域をもつことが推測された。各種ドメインを欠損させたsGFPとの融合タンパク質をヒメツリガネゴケ細胞で発現させることで，局在変化を調べ，正常なドット状局在に重要な領域を絞りこんだ。またPpSLHがPGと結合できるか明らかにするために，in vitro結合アッセイを試みた。さらに4重遺伝子破壊ラインで検出される葉緑体内巨大小胞膜が，葉緑体のどの膜由来であるのかを確かめるため，既知の葉緑体膜結合タンパク質をマーカーとし，小胞膜の由来を調査した。