成体の神経筋接合部シナプスの維持におけるCcnファミリー因子の役割
成体の神経筋接合部シナプスの維持におけるCcnファミリー因子の役割
Ccn家族因子在成人神经肌肉接头突触维持中的作用
批准号：
21K06392
负责人：
大河原 美静
金额：
$2.66万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
中文摘要
翻译
神経筋接合部(NMJ)は運動神経と筋肉を結ぶシナプスである。研究代表者は胎生期の神経筋接合部の形態形成と機能にCtgfがLrp4と結合し、Lrp4たんぱく質が細胞膜上に維持されることが必要であること報告した。Lrp4が胎生期だけではなく成体NMJの維持にも必要であることが分かっているため、本研究では、Ctgfやそれが属するCcnファミリー因子が同様にNMJの維持に必要であるかを検討した。令和４年度は、エレクトロポレーション技術を用いCtgf(Ccn2)遺伝子に対するshRNA(shCtgfとする) と同時にヒトCtgfの各ドメインのcDNAををCtgf+/-マウス前脛骨筋筋繊維に導入しCtgfの発現制御を行った。そして２週間後にこのマウスの①歩行時の筋力をCatWalk systemやビームテスト（網でできた橋を渡る際の踏み外すステップの数と速度を測定する）で評価し、それぞれの前脛骨筋の筋力と運動能力の評価を行う。次に、②前脛骨筋の筋繊維を繊維ごとに顕微鏡下でばらばらにし、それぞれの神経筋接合部の大きさや形態を免疫染色で確認後、Metamorphソフトウェアで測定・解析した。実験①②を行って検討した結果より、マウスCtgfは筋力を維持するために必要であり、CtgfのCTドメインが必要であることが明らかとした。CTドメインはCtgfの全長とは異なり神経筋接合部に集積することがなかったことから、CTドメインは神経筋接合部の機能を維持することには必要であるが、それだけでは神経筋接合部に集積することはできないことが明らかとなった
英文摘要
神経筋接合部(NMJ)は運動神経と筋肉を結ぶシナプスである。研究代表者は胎生期の神経筋接合部の形態形成と機能にCtgfがLrp4と結合し、Lrp4たんぱく質が細胞膜上に維持されることが必要であること報告した。Lrp4が胎生期だけではなく成体NMJの維持にも必要であることが分かっているため、本研究では、Ctgfやそれが属するCcnファミリー因子が同様にNMJの維持に必要であるかを検討した。令和４年度は、エレクトロポレーション技術を用いCtgf(Ccn2)遺伝子に対するshRNA(shCtgfとする) と同時にヒトCtgfの各ドメインのcDNAををCtgf+/-マウス前脛骨筋筋繊維に導入しCtgfの発現制御を行った。そして２週間後にこのマウスの①歩行時の筋力をCatWalk systemやビームテスト（網でできた橋を渡る際の踏み外すステップの数と速度を測定する）で評価し、それぞれの前脛骨筋の筋力と運動能力の評価を行う。次に、②前脛骨筋の筋繊維を繊維ごとに顕微鏡下でばらばらにし、それぞれの神経筋接合部の大きさや形態を免疫染色で確認後、Metamorphソフトウェアで測定・解析した。実験①②を行って検討した結果より、マウスCtgfは筋力を維持するために必要であり、CtgfのCTドメインが必要であることが明らかとした。CTドメインはCtgfの全長とは異なり神経筋接合部に集積することがなかったことから、CTドメインは神経筋接合部の機能を維持することには必要であるが、それだけでは神経筋接合部に集積することはできないことが明らかとなった
期刊论文(16)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
DOI：
10.1016/j.neuropharm.2021.108637
发表时间：
2021-06-19
期刊：
NEUROPHARMACOLOGY
影响因子：
4.7
作者：
[Inoue, Taro, Ohkawara, Bisei, Ohno, Kinji]
通讯作者：
Ohno, Kinji
Single-nucleus RNA-seq identifies transcriptional regulation of embryonic neuromuscular junction in skeletal muscle
单核 RNA-seq 鉴定骨骼肌中胚胎神经肌肉接头的转录调控
单核 RNA-seq 鉴定骨骼肌中胚胎神经肌肉接头的转录调控
DOI：
--
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
作者：
[Kawachi Toshihiko, Masuda Akio, Yamashita Yoshihiro, Takeda Jun‐ichi, Ohkawara Bisei, Ito Mikako, Ohno Kinji, Bisei Ohkawara]
通讯作者：
Bisei Ohkawara