TRIM39Rが惹起するI型IFN応答によるCOVID-19治療法の開発

利用 TRIM39R 诱导的 I 型 IFN 反应开发 COVID-19 治疗方法

• 批准号: 21K06566
• 负责人: 倉田 里穂
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06566/
• 关键词: TRIM39R; 1型IFN応答; COVID-19; hACE2; hTMPRSS2; SARS-Cov2-Luc; I型IFN応答; COVID－１９; hACE２; SARS-CoV2-Luc; インターフェロン; 感染症; 炎症; TRIM

2019年末、SARS-Cov-2(COVID-19)のパンデミックは、人類に対する衛生上および経済的な脅威であり、解決すべき重大な感染症である。従来のコロナウイルス感染と類似しているものの重篤な急性症状を引き起こし、その病態は未知であり、特異な機構があると考えられている。病態が不明なので、治療薬やワクチンの開発は未だに、難航している。極近年、COVID-19が感染を成立するために、宿主のI型インターフェロン(IFN)シグナルを抑制している特異性が判明した。この機構は、MERSやSARSなどの近縁のコロナウイルスには存在しない。我々は、TRIM39Rはウイルス防御においても重要なI型IFNの制御分子と考えている。そこで、本研究はCOVID-19感染の際に、TRIM39Rがウイルス防御能を惹起するかを検討することを目的とする。初年度には、エピソーマルベクターへCOVID-19のエントリー受容体であるhACE2およびhTMPRSS2をクローニングした。それぞれの細胞膜貫通ドメイン欠損体であるΔTMhACE2およびΔTMhTMPRSS2と、分泌型を狙ったExhACE2およびExhTMPRSS2を作成した。また、N末とC末にそれぞれV5-6xHisタグを着けた12個のコンストラクトを作製することができ、培養細胞へ遺伝子導入して発現も確認できた。また、偽COVID-19ウイルス粒子の調整も行なっており、増殖生を欠損させたレンチウィルスをルシフェラーゼで検出できるベクターを構築し、ウイルスのパッケージングに必要なプラスミドおよびSタンパク質を発現するエンベロープベクターを用いてSARS-CoV2-Lucウィルス粒子を調整した。予備実験として、偽ウイルスを用いた培養細胞への感染後、Luc定量系構築を試みたが測定感度が良好でなかったため、現在、偽ウイルスの感染条件の最適化の条件検討を行っている。

At the end of 2019, SARS-Cov-2 (COVID-19) was responsible for the prevention and treatment of major infectious diseases in human health. The type of infection is similar to that of acute symptoms. The symptoms are unknown, and the special institutions are not aware of the symptoms. The state of illness is unknown, the disease is not clear, the treatment is not clear, and the flight is not clear. In recent years, COVID-19 infection has been established, and the host type I virus infection has been identified by the host virus (IFN). There is a problem in the local government, MERS, SARS, and local financial institutions. We are responsible for the defense of the important type I IFN, the controller of the type I IFN. In this study, the prevention of COVID-19 infection and TRIM39R infection can arouse the risk of infection. In the first year of the year, COVID-19 was used in the first year. The receptive body was hACE2 in hTMPRSS2. The membrane of the cell membrane is not clear. The body is divided into Δ TMhACE2, Δ TMhTMPRSS2, secretory membrane, ExhACE2, and ExhTMPRSS2. At the end of the day, at the end of the C terminal, the V5-6xHis device is used to make sure that the 12 customers are not allowed to enter the computer to make sure that they are registered. The following is the case: COVID-19, particles, particles, SARS-CoV2-Luc, particles, particles. After infection, Luc quantitative assay showed that the sensitivity was good. Now, the conditions for infection are optimized.

项目成果

Establishment of novel protein interaction assays between Sin3b and REST Using surface plasmon resonance and time-resolved 4 fluorescence energy transfer.

使用表面等离子体共振和时间分辨 4 荧光能量转移建立 Sin3b 和 REST 之间的新型蛋白质相互作用测定。

• 发表时间: 2021
• 作者: M. Harada;R. Kurata;Y. Yoshida;T. Yonezawa
• 通讯作者: T. Yonezawa

原虫NTPase活性の高感度測定系の樹立および原虫感染症に対する創薬研究

原虫NTP酶活性高灵敏测量系统的建立及原虫感染药物发现研究

• 发表时间: 2021
• 期刊: Precision Medicine
• 作者: 倉田里穂;原田将光;砂河孝行;仙波宏章;武田憲彦;前村浩二;米澤朋
• 通讯作者: 米澤朋

Nucleoside triphosphate hydrolases assay in Toxoplasm gondii and Neospora caninum for high-throughput screening using robot arm.

使用机械臂对弓形虫和犬新孢子虫进行核苷三磷酸水解酶测定，进行高通量筛选。

• DOI: 10.3791/62874
• 发表时间: 2022
• 期刊: Journal of Visualized Experiments
• 作者: Riho Kurata;Masamitsu Harada;Jun Nagai;Xiaofeng Cui;Takayuki Isagawa;Hiroaki Semba;Yasuhiro Yoshida;Norihiko Takeda;Koji Maemura;Tomo Yonezawa.
• 通讯作者: Tomo Yonezawa.

炎症応答を制御するTRIM39欠損マウスの解析

TRIM39 缺陷小鼠控制炎症反应的分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 倉田里穂;原田将光;米澤朋;吉田安宏
• 通讯作者: 吉田安宏