TRIM39Rが惹起するI型IFN応答によるCOVID-19治療法の開発

点击翻译按钮获取中文摘要

2019年末、SARS-Cov-2(COVID-19)のパンデミックは、人類に対する衛生上および経済的な脅威であり、解決すべき重大な感染症である。従来のコロナウイルス感染と類似しているものの重篤な急性症状を引き起こし、その病態は未知であり、特異な機構があると考えられている。病態が不明なので、治療薬やワクチンの開発は未だに、難航している。極近年、COVID-19が感染を成立するために、宿主のI型インターフェロン(IFN)シグナルを抑制している特異性が判明した。この機構は、MERSやSARSなどの近縁のコロナウイルスには存在しない。我々は、TRIM39Rはウイルス防御においても重要なI型IFNの制御分子と考えている。そこで、本研究はCOVID-19感染の際に、TRIM39Rがウイルス防御能を惹起するかを検討することを目的とする。初年度には、エピソーマルベクターへCOVID-19のエントリー受容体であるhACE2およびhTMPRSS2をクローニングした。それぞれの細胞膜貫通ドメイン欠損体であるΔTMhACE2およびΔTMhTMPRSS2と、分泌型を狙ったExhACE2およびExhTMPRSS2を作成した。また、N末とC末にそれぞれV5-6xHisタグを着けた12個のコンストラクトを作製することができ、培養細胞へ遺伝子導入して発現も確認できた。また、偽COVID-19ウイルス粒子の調整も行なっており、増殖生を欠損させたレンチウィルスをルシフェラーゼで検出できるベクターを構築し、ウイルスのパッケージングに必要なプラスミドおよびSタンパク質を発現するエンベロープベクターを用いてSARS-CoV2-Lucウィルス粒子を調整した。予備実験として、偽ウイルスを用いた培養細胞への感染後、Luc定量系構築を試みたが測定感度が良好でなかったため、現在、偽ウイルスの感染条件の最適化の条件検討を行っている。