消化管の薬物吸収を制御する新規促進拡散型オリゴペプチドトランスポーターの分子同定

今年度は、申請者が見出した新規オリゴペプチドトランスポーター(EOPT1)およびアイソフォームの基質認識性を明らかにすることおよびその発現プロファイルについて、検討することを計画していた。EOPT1の基質認識性について、EOPT1が内因性オリゴペプチドだけでなく、B-ラクタム系抗生物質を輸送しうることを見出すことに成功した。これは、消化管における既知の管腔膜側の取り込みトランスポーターPEPT1のカウンターパートの性質として働きうることを示す重要な知見であると考えられる。またEOPT1のアイソフォームの解析より、新たなオリゴぺチドトランスポーター（EOPT2）を見出すことに成功した。このEOPT2の基質認識性の解析の結果、EOPT2は一部のオリゴペプチドを認識しうること、加えて薬物一部を輸送できることを発見した。現在他のEOPTアイソフォームの中に、ペプチドを認識できるものがないかについて、検討を進めている。EOPT1のmRNA発現解析を行った結果、ラット消化管各部およびヒト小腸上部とCaco-2細胞において、発現が確認された。その発現量は、ラット消化管各部で大きな差は観察されなかった。同様にEOPT2もヒト小腸上部とCaco-2細胞に発現が確認された。次にタンパク質発現を確認するために、免疫染色およびWestern blotを試みた。しかし特異性低く、発現および局在の評価ができなかった。そこで消化管上皮細胞での局在性を明らかにするために、EGFP融合EOPTsの発現Caco-2にて局在を評価したところ、EOPT1、EOPT2ともに、同細胞の基底膜に主に発現していた。現在EOPT1、およびEOPT2抗体作成を含めて、内因性タンパク質発現評価の計画を検討している。

今年度は、申請者が見出した新規オリゴペプチドトランスポーター(EOPT1)およびアイソフォームの基質認識性を明らかにすることおよびその発現プロファイルについて、検討することを計画していた。EOPT1の基質認識性について、EOPT1が内因性オリゴペプチドだけでなく、B-ラクタム系抗生物質を輸送しうることを見出すことに成功した。これは、消化管における既知の管腔膜側の取り込みトランスポーターPEPT1のカウンターパートの性質として働きうることを示す重要な知見であると考えられる。またEOPT1のアイソフォームの解析より、新たなオリゴぺチドトランスポーター（EOPT2）を見出すことに成功した。このEOPT2の基質認識性の解析の結果、EOPT2は一部のオリゴペプチドを認識しうること、加えて薬物一部を輸送できることを発見した。現在他のEOPTアイソフォームの中に、ペプチドを認識できるものがないかについて、検討を進めている。EOPT1のmRNA発現解析を行った結果、ラット消化管各部およびヒト小腸上部とCaco-2細胞において、発現が確認された。その発現量は、ラット消化管各部で大きな差は観察されなかった。同様にEOPT2もヒト小腸上部とCaco-2細胞に発現が確認された。次にタンパク質発現を確認するために、免疫染色およびWestern blotを試みた。しかし特異性低く、発現および局在の評価ができなかった。そこで消化管上皮細胞での局在性を明らかにするために、EGFP融合EOPTsの発現Caco-2にて局在を評価したところ、EOPT1、EOPT2ともに、同細胞の基底膜に主に発現していた。現在EOPT1、およびEOPT2抗体作成を含めて、内因性タンパク質発現評価の計画を検討している。