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塩基性薬物輸送を担う血液脳関門オーファントランスポーターの機能解明

阐明负责基本药物转运的血脑屏障孤儿转运蛋白的功能

基本信息

批准号：
17K15521
负责人：
樋口慧
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、血液脳関門（BBB)におけるオーファントランスポーターSLC12A9およびSLC45A4の輸送機能を解明し、塩基性薬物の脳移行性に与える影響について明らかにすることを目的とした。まずヒトBBBモデル細胞であるhCMEC/D3細胞におけるSLC12A9およびSLC45A4発現のmRNA発現を確認した。その後、両トランスポーター遺伝子ノックダウンがが薬物取り込みに与える影響をsiRNAを用いて検討した。その結果、SLC45A4ノックダウンをした細胞では、塩基性薬物取り込みが一部減少することを新たに見出した。一方でSLC12A9ノックダウンでは塩基性薬物取り込みが増加した。このことから、両オーファントランスポーターがヒトBBB モデル細胞における塩基性薬物取り込みに何らかの影響を与えうることを示した重要な知見であると考えられる。次に各トランスポーター強制発現させたHEK293 細を用いて、直接的薬物取り込み能を評価したが、mock細胞の取り込みとの差は観察されなかった。そこでホスト細胞での内在性トランスポーターをノックアウトした実験系の構築を目指して、hCMEC/D3細胞にCRISPER-Cas9システムによるトランスポーターノックアウト細胞の調製を行った。hCMEC/D3 細胞におけるCRIPSER-Cas9システムの適応条件をABCB1遺伝子を用いて検討を行い、当該システムがhCMEC/D3細胞に適応し、トランスポーターノックアウトが可能であることを確認した。hCMEC/D3由来SLC45A4ノックアウトした候補細胞の調製を完了した。それらの細胞を用いることで、詳細なBBBオーファントランスポーターの輸送機能解析が可能となることが期待される。

In this study, blood samples, blood samples (BBB), blood samples, blood samples, blood Please BBB the mRNA and confirm that the mRNA has been confirmed by the hCMEC/D3 cell, the SLC12A9 cell and the SLC45A4. After that, please tell me how to use the siRNA to pick up the items and use the words in the box. The results show that the SLC45A4 has a significant effect on the number of cells, and the basic material is used to make a new report. On the one hand, you need to SLC12A9 the basic materials. You need to add more. I don't know what to do, I don't know, I don't know. In each case, you need to make sure that the HEK293 is used, the direct data is available, and the mock cell is used to detect the error. This is not a good idea. The hCMEC/D3 cell is the target, the CRISPER-Cas9 cell is the target, and the cell is the line. HCMEC/D3