脳由来胆汁酸の機能解明と脳梗塞新規治療デザイン確立への応用

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令和4年度は正常脳および中大脳動脈完全梗塞（pMCAO）マウス脳において胆汁酸類ブレインマップ作製をおこなった。胆汁酸類としてタウロコール酸（TA）を標的とし質量顕微鏡法を用いてTAの直接的イメージングを実施した。9-aminoacridineによる蒸着後にメタノールで再結晶化を施しネガティブモードにてTA解析をおこなった結果、正常脳およびpMCAO脳の両方でTAが検出された。一方でこの解析条件下ではTAとして検出されるm/Zに他分子の同位体の混入の可能性が考えられたため、CHCAによる蒸着を施しポジティブモードにてTA解析をおこなった。この蒸着工程においてはマトリックス蒸着装置iMLayerを用いて膜厚測定下でCHCA蒸着を施し、実験間やサンプル間での蒸着厚のばらつきを抑制することができた。TA解析の結果、複数存在するTA付加体の中のいくつかで正常脳に比べてpMCAO脳での存在量増加が確認された。この結果にはm/Zに他分子の同位体混入の可能性はないと思われ、ネガティブモードよりもより正確な検出が可能となった。今後、より広範囲における検出をおこない脳での胆汁酸類ブレインマップを作製する予定である。さらに令和4年度は、胆汁酸合成律速酵素であるCyp7a1を欠損するマウスの解析をおこなった。質量顕微鏡法解析によりホモKOマウス正常脳ではTA存在量の減少が見られた。現在、ヘテロKOマウスの交配を重ね得られたCyp7a1ホモKOマウスでの脳梗塞手術を実施しているが、複数の交配ペアにおいてホモ/ヘテロを含めた出生率の極端な低下により十分な個体数が得られていない。今後、十分な個体数が得られる環境を整え、Cyp7a1ホモKOマウスにおいて脳梗塞手術をおこない正常脳機能および脳梗塞病態における脳由来胆汁酸シグナルの生理的意義を明らかにする。