分子間協働から創出される細胞容積調節能を利用した虚血性壊死からの救済策の開発

TRPM7とLRRC8の相互関連性を示唆するための機能解析をパッチクランプ法を用いて行いました。この実験から、外向き整流性を持つ非選択的にカチオンの透過性を持つTRPM7活性を阻害すると外向き整流性を持つアニオン選択性を持つLRRC8活性も抑制されることが明らかになりました。これにより、TRPM7活性を制御することで、LRRC8の活性制御が可能であるという仮説が立てられました。つまり、カチオンチャネルとアニオンチャネルの機能的カップリングがあることが分かりました。この仮説を確かめるために、DT40細胞株実験系を使用し、TRPM7の発現を一切なくすことができるTRPM7欠損細胞とTRPM7の欠損細胞に目的を持ったアミノ酸変異を施し、過剰発現をさせた細胞系を構築しました。アニオンとカチオンの2種類のイオンチャネル活性を、同時にリアルタイムで測ることができる実験系を構築し、TRPM7とLRRC8の関連性をより明確に実証しました。また、作成した細胞の低浸透圧刺激に応答する調節性容積減少能を測定することで、TRPM7が細胞容積減少のトリガーへの関与のみならず縮むフェィズにおいても間接的にかかわることを示しました。さらに、TRPM7-LRRC8の物理的相互作用を免疫沈降法や共局在を免疫染色法にて評価しました。そして、TRPM7活性変化による長期的なLRRC8を含む転写因子等の関連分子の増減をマイクロアレイによって確認しました。以上の実験により、TRPM7-LRRC8の機能連関が確認できた。最後に、虚血誘発性細胞膨大した細胞にTRPM7活性誘発LRRC8活性化させることで、RVDを引き起こし、壊死から救済するための策については、検討中です。この結果は新たな治療法の開発につながるだろうと考えています。

TRPM7とLRRC8の相互関連性を示唆するための機能解析をパッチクランプ法を用いて行いました。この実験から、外向き整流性を持つ非選択的にカチオンの透過性を持つTRPM7活性を阻害すると外向き整流性を持つアニオン選択性を持つLRRC8活性も抑制されることが明らかになりました。これにより、TRPM7活性を制御することで、LRRC8の活性制御が可能であるという仮説が立てられました。つまり、カチオンチャネルとアニオンチャネルの機能的カップリングがあることが分かりました。この仮説を確かめるために、DT40細胞株実験系を使用し、TRPM7の発現を一切なくすことができるTRPM7欠損細胞とTRPM7の欠損細胞に目的を持ったアミノ酸変異を施し、過剰発現をさせた細胞系を構築しました。アニオンとカチオンの2種類のイオンチャネル活性を、同時にリアルタイムで測ることができる実験系を構築し、TRPM7とLRRC8の関連性をより明確に実証しました。また、作成した細胞の低浸透圧刺激に応答する調節性容積減少能を測定することで、TRPM7が細胞容積減少のトリガーへの関与のみならず縮むフェィズにおいても間接的にかかわることを示しました。さらに、TRPM7-LRRC8の物理的相互作用を免疫沈降法や共局在を免疫染色法にて評価しました。そして、TRPM7活性変化による長期的なLRRC8を含む転写因子等の関連分子の増減をマイクロアレイによって確認しました。以上の実験により、TRPM7-LRRC8の機能連関が確認できた。最後に、虚血誘発性細胞膨大した細胞にTRPM7活性誘発LRRC8活性化させることで、RVDを引き起こし、壊死から救済するための策については、検討中です。この結果は新たな治療法の開発につながるだろうと考えています。