脊髄小脳変性症でのPKCリン酸化を介した神経保護機構の解明と新規治療法への応用

阐明脊髓小脑变性中 PKC 磷酸化介导的神经保护机制及其在新治疗中的应用

• 批准号: 21K06801
• 负责人: 白藤 俊彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06801/
• 关键词: 脊髄小脳変性症; リン酸化; PKC; リン酸化プロテオーム

脊髄小脳変性症(SCA)患者の小脳プルキンエ細胞ではProtein kinase C (PKC)リン酸化亢進が共通して起こり、小脳プルキンエ細胞保護的に働くことが報告されている。本研究の目的はSCAでリン酸化が亢進するPKCリン酸化基質やそのシグナル経路を同定し、そのPKCリン酸化経路を同定し、それをターゲットにした数多くのSCAに共通して適用できる新規治療法を開発することである。本年度は、前年度に同定したVCP, PLEKHG4のリン酸化欠損・模倣変異体を用いた機能解析を行った。１．VCP, PLEKHG4のリン酸化欠損・模倣変異体を整備した。２．VCPについては、siRNAでノックダウンを行い、cleaved.caspase 7, cleaved. PARPなどのアポトーシスが増加することを同定した。また、ミトコンドリア機能障害のマーカーであるGDF15の増加も確認した。また、siRNAでノックダウンしたVCPをレスキューする実験を行い、これらのアポトーシス、ミトコンドリア機能障害ともに改善することを確認した。３．PLEKHG4については、RAC1, CDC42のGEFとして働くので、これらの相互作用をリン酸化変異体を用いたRAC1, CDC42とのpull down アッセイを行った。結果的にはリン酸化欠損変異体ではRAC1, CDC42との相互作用が低下する傾向を認めた。マウスの小脳を用いた解析については、脱リン酸化酵素阻害剤の選定を行い、サンプルの脱リン酸化を防ぐ方法について検討を行い、現状よりも確実な方法を選定した。また、リン酸化プロテオームの解析方法についても、新たな試薬、手法を見出した。

Protein kinase C (PKC) hyperacidification in patients with chiropractic microsomia (SCA) has been reported to be common and protected by microsomia. The purpose of this study is to increase the effect of SCA acidification on PKC acidification. the path of acidification is the same, and the path of acidification is the same, and there are many problems in SCA. The new rules and regulations are used to introduce new rules and regulations. The current year and the previous year are the same as that of the previous year, and the PLEKHG4 model is acidified by using the machine to analyze the data. 1.VCP, PLEKHG4. Acidify the whole body of the mold. 2.VCP, cleaved.caspase 7, cleaved. The PARP order is the same as that of the same order. Please do not know if you will be able to block the GDF15 and add confirmation. This is the first time that you have a chance to improve your ability to improve your ability to improve your performance. You need to make sure that you will not be able to improve the performance of your VCP. 3.PLEKHG4, RAC1, RAC1, CDC42, GEF interaction, acidification, acidification, RAC1, CDC42, pull down, and so on. Results the results showed that the RAC1 was acidified and the interaction of CDC42 was low. In this paper, we use the analytical method, the acidizing enzyme blocking method, the acidizing method, the anti-acidizing method and the anti-acidizing method. The analytical method of acidizing and acidizing is to determine the accuracy of the method, the new method, and the technique.