イノシン三リン酸分解酵素欠損の分子病態解明

阐明三磷酸肌苷降解酶缺乏症的分子发病机制

• 批准号: 21K06869
• 负责人: 土本 大介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06869/
• 关键词: イノシン三リン酸; 発達性およびてんかん性脳症; 静止膜電位脱分極; EIEE35; ITPA; てんかん; 脱分極; 膜電位; イノシン

2022年度はITPA欠損マウスNeuro2a培養細胞を用い、オートファゴソーム、小胞体、ゴルジ体、の染色パターンをコントロール細胞と比較した。また同細胞の全抽出液を用いた二次元電気泳動後のゲル銀染色パターンをコントロール細胞と比較した。いずれも差を認めなかった。ITPA欠損マウスNeuro2a細胞にヒトITPA発現ベクターもしくはコントロールベクターを導入したクローンを各々３クローン以上樹立した。これらの細胞を用いて膜電位評価を行ったところ、ITPA欠損マウス脳スライス神経細胞で観察された結果と同様の静止膜電位脱分極が観察された。このため今後はこれらの細胞を用いてITPA欠損が引き起こす影響を解析することとした。その比較をRNAseqで行うため、これらの細胞よりtotal RNAを調製した。コントロール細胞と比較してITPA欠損マウスNeuro2a細胞特異的に細胞増殖抑制と細胞死誘導がかかる培養条件を検討し見出した。この培養条件を用いて、イノシン三リン酸産生経路を明らかにするためマウス遺伝子に対するshRNAのレンチウイルスベクターライブラリー感染実験を行い、細胞増殖抑制／細胞死をレスキューするshRNAのスクリーニングを開始した。最終的に残存細胞ゲノムDNAを解析して目的shRNAの標的遺伝子を確認する。哺乳動物におけるイノシン三リン酸蓄積防止におけるNUDT16の寄与を確認するために、以前に作成したNudt16 欠損マウス(Nudt16 KO)と脳神経系特異的ITPA欠損マウスItpa-flox/Nes-Creマウスとの交配を開始し、Itpa-flox(F/+)/Nes-Cre(Tg)/Nudt16(-/-)マウスを得た。最終的にはItpa-flox(F/F)/Nes-Cre(Tg)/Nudt16(-/-)を作成、解析予定である。

In 2022, Neuro2a cells were cultured and compared with each other. The whole cell was extracted from the same solution, and then the silver stain was used to compare the cells. I don't know what to do with it. ITPA is short of Neuro2a cells. ITPA is short of Neuro2a cells. ITPA is short of Neuro 2a cells. The results of the study showed that there was no significant difference between the results of the study and those of the study. The analysis of the impact of ITPA deficiency on the future development of human beings Comparison of RNAseq and total RNA modulation Cell growth inhibition and cell death induction were investigated in comparison with ITPA deficiency in Neuro2a cells. The culture conditions are used to determine whether the shRNA pathway is active or not, and whether the shRNA pathway is active or not. Finally, the remaining cells must be analyzed for identification of the target shRNA. Mammalian NUDT16 and NUDT 16(-/-) were previously established to prevent the accumulation of triacid. The final Itpa-flox(F/F)/Nes-Cre(Tg)/Nudt16(-/-) is created and analyzed.

项目成果

マウスモデルを用いた早期乳児てんかん性脳症EIEE35の発症メカニズムの解明

使用小鼠模型阐明早期婴儿癫痫性脑病EIEE35的发病机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Seigo Terawaki;Qiang Zhang;Daisuke Oikawa;Bangzhong Lin;Kazuto Nunomura;Shinsuke Komagawa;Yoshinosuke Usuki;Fuminori Tokunaga;土本大介
• 通讯作者: 土本大介