Construction of Multiple Sample Analysis System Using FRET System and Search for Inhibitors of Virus Polymerization Proteins

利用FRET系统构建多样品分析系统并寻找病毒聚合蛋白抑制剂

• 批准号: 21K06872
• 负责人: 上 大介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06872/
• 关键词: FRET; 阻害剤; 多検体解析; ウイルス由来重合タンパク質

RNAウイルスSARS-CoV-2は世界中で大流行し、治療薬の開発競争が激化している。治療薬のターゲット分子はウイルスの表面抗原やRNAポリメラーゼが多く、細胞内で増加したウイルスゲノムRNA除去を目指した治療薬開発は報告がない。このゲノムRNAはNucleocapsid protein (N protein)と結合、さらにN protein同士で重合することで、細胞内で安定化する。本研究はSARS-CoV-2のN proteinの重合を阻害する低分子化合物をハイスループットシステムにて探索し、重合阻害の有効性をvitroにて証明することを目的としている。そこで我々は重合化を評価できるFRETシステムとイメージングサイトメータを用いたシステムを設計・構築した。このシステムを用いて、重合阻害を可能にする低分子化合物を探索し、そのゲノムRNAの安定性をvitroにて解析する。これらの結果と解析システムの構築はN proteinをもつ数多くのウイルスに対する新たな治療薬の開発の先駆的な手法となりえる。今年度は前年度で問題点を解決した新しいベクター構築を行い、その評価を行ってみたが、予定の結果は得られなかった。そこでレトロウイルスを用いて安定発現株を樹立し、シングルセルクローニングを行った。取得した細胞はIn Cell Analyzer2200にて撮像し、FRETのポジティブコントロール、ネガティブコントロール株と比較した。

In the world of pandemic pandemics and treatment of RNA, there is a struggle to intensify the epidemic in the world. The RNA antigens were detected by molecular antigens, and the intracellular antigens were increased by the addition of intracellular antigens to treat the disease. The RNA was removed. The combination of RNA Nucleocapsid protein (N protein), superposition of N protein and intracellular tranquilization. In this study, SARS-CoV-2 N protein superposition, low molecular weight compounds, low molecular weight compounds, low molecular weight compounds, We need to know that we need to use the FRET software to design the design of the computer. It is possible that low molecular weight compounds are explored, RNA stability is analyzed, vitro analysis is performed. The results of the test results show that there is a lot of information about the number of protein patients, and the new treatment methods are used in the first place. For the current year and the previous year, the problem points will be solved. New information will be received. Please do so. You will be informed that the results will be satisfactory. Please tell me that if you want to stabilize the plant, you will have to pay attention to it. Get a picture of the In Cell Analyzer2200 image, make a comparison of the number of plants in the picture, and compare the number of trees.