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マラリア原虫メロゾイト形成期のターゲトーム解析による赤血球侵入・感染機構の解明

通过靶标组分析阐明疟原虫裂殖子形成阶段的红细胞侵袭和感染机制

基本信息

批准号：
21K06986
负责人：
西翔
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06986/
关键词：
マラリア原虫ターゲトームメロゾイト侵入・感染

项目摘要

本年度は、ネズミマラリア原虫Plasmodium bergheiのメロゾイト形成期特異的転写因子AP2-M3について、GFP融合遺伝子発現株を作製し、その発現パターンを調べた。さらに、ChIP-seq解析により、AP2-M3の標的遺伝子を同定した。その中には、原虫内膜構造やロプトリーに関連する遺伝子が多く含まれていた。そして、標的遺伝子解析の結果を3種のメロゾイト形成期特異的転写因子AP2-M1、AP2-M2、AP2-M3の間で比較することで、メロゾイト形成期において、遺伝子発現がどのような順序で活性化されていくかの全体像を得ることができた。現在はこの結果をもとに、マラリア原虫のメロゾイト形態形成や宿主細胞侵入に関連する新規の遺伝子探索を行っており、いくつかの有力な候補遺伝子を発見している。これらについてはGFP融合遺伝子発現株を作製することで細胞内での局在を明確にするとともに、DiCre-loxPシステムを用いた条件的ノックアウト技術により、その機能を調べていく予定である。以上の結果に加え、AP2-M1については、DNA結合ドメインであるAP2ドメインのGST融合リコンビナントタンパク質を用いてDIP-seqを行い、ChP-seqから予想された結合配列との一致を確認した。今後、その他2つの転写因子についても結合配列をin vitroで確認するとともに、それらの配列のcisエレメントとしての機能をChIP-qPCRやセントロメアプラスミドを用いたレポーターアッセイによって評価する。

This year's protozoa Plasmodium berghei's formation period-specific transcription factors AP2-M3, GFP fusion gene, そ子発开户を产し, and その発 appear, パターンを动べた.さらに, ChIP-seq analysis により, AP2-M3 target remains unchanged.その中には, protozoa inner membrane structure やロプトリーにassociated する伝子が多く有まれていた. The result of the analysis of the target and target residues is the ratio between the three types of のメロゾイトformation-stage-specific transformation factors AP2-M1, AP2-M2, and AP2-M3. Compared with することで, メロゾイトformation period において, and remaining 伝子発 appear がどのThe overall image of the activation sequence of the ようなでされていくかのを得ることができた. Now it is related to the formation of morphology of protozoa and host cell invasionすくつかの力な睝子を発见している.これらについては GFP fusion genetic material 伝子発existing strain をすることで Intracellular bureau in を clear にするとともに, Di Cre-loxP システムを uses the いた condition ノックアウトtechnique により and そのfunctional をtuned べていく predetermined である. The above results are the result of に加え, AP2-M1 については, DNA binding ドメインであるAP2 ドメインのGST fusion リコンビThe quality of ナントタンパク was confirmed using いてDIP-seqを行い and ChP-seqからされたcombination and alignment. From now on, そのhis 2つの転write factor についてもcombination arrangementをin In vitro するとともに, それらのalignment のcisエレメントとしてのfunctional をChI P-qPCR やセントロメアプラスミドを was evaluated by いたレポーターアッセイによって.