マラリア原虫の受精に関与する雄分子PyMiGSと相互作用する雌性生殖体分子の同定

マラリア原虫は、媒介蚊の消化管内で有性生殖を行う。有性生殖期に発現する分子はこれまでに複数報告されている一方で、その相互作用についてはほとんどわかっていない。本研究では、マラリア原虫の受精に関わる分子機構を明らかにすることを目標とし、有性生殖期において雄特異的に発現するPyMiGSを足がかりにして、改良型近位依存性ビオチン標識AirIDを用いて相互作用する分子の探索を行う。本年度は、解析を行うためにPyMiGSのAirID融合原虫を２種作出することに成功した。作製したPyMiGSのC末にAirIDを融合した原虫を抗原とし、一緒に融合したAgiaタグに対する抗体、及び、MiGS抗体を用いた免疫染色により、MiGSは野生型原虫と同様に雄性生殖母体の細胞小器官であるオスミオフィリックボディに局在していることが示された。しかしながら、このC末にAirIDを融合した原虫では、雄性生殖体の放出能が、野生型原虫と比べて低下することが明らかとなった。このことから、この組換え原虫は、雄性生殖体におけるMiGSと相互作用する分子を探索する目的には適さないため、生殖母体のオスミオフィリックボディで相互作用する分子の探索に焦点を絞ることとした。もう1種のMiGS::AirID原虫は、クローン化に成功したところであり、局在の確認等これから行う予定である。また、陰性コントロールとするために、雌特異的に発現する既知の分子のAirID融合原虫の作出に成功した（1種）。同時に、陰性コントロール（既知の分子のAirID原虫）のバックアップ用に、他の候補分子を探索するため、データベースの発現プロファイルから雌性生殖母体で発現していると予測される7分子のmyc原虫の作製を試みた結果、3種の組換え原虫の作出に成功した。これらの局在解析を順次行い、コントロールの候補抗原となり得るかを確認する予定である。

マラリア原虫は、媒介蚊の消化管内で有性生殖を行う。有性生殖期に発現する分子はこれまでに複数報告されている一方で、その相互作用についてはほとんどわかっていない。本研究では、マラリア原虫の受精に関わる分子機構を明らかにすることを目標とし、有性生殖期において雄特異的に発現するPyMiGSを足がかりにして、改良型近位依存性ビオチン標識AirIDを用いて相互作用する分子の探索を行う。本年度は、解析を行うためにPyMiGSのAirID融合原虫を２種作出することに成功した。作製したPyMiGSのC末にAirIDを融合した原虫を抗原とし、一緒に融合したAgiaタグに対する抗体、及び、MiGS抗体を用いた免疫染色により、MiGSは野生型原虫と同様に雄性生殖母体の細胞小器官であるオスミオフィリックボディに局在していることが示された。しかしながら、このC末にAirIDを融合した原虫では、雄性生殖体の放出能が、野生型原虫と比べて低下することが明らかとなった。このことから、この組換え原虫は、雄性生殖体におけるMiGSと相互作用する分子を探索する目的には適さないため、生殖母体のオスミオフィリックボディで相互作用する分子の探索に焦点を絞ることとした。もう1種のMiGS::AirID原虫は、クローン化に成功したところであり、局在の確認等これから行う予定である。また、陰性コントロールとするために、雌特異的に発現する既知の分子のAirID融合原虫の作出に成功した（1種）。同時に、陰性コントロール（既知の分子のAirID原虫）のバックアップ用に、他の候補分子を探索するため、データベースの発現プロファイルから雌性生殖母体で発現していると予測される7分子のmyc原虫の作製を試みた結果、3種の組換え原虫の作出に成功した。これらの局在解析を順次行い、コントロールの候補抗原となり得るかを確認する予定である。